[发明专利]一种apoB基因SNP检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种apo B基因SNP检测特异性引物和液相芯片。 

背景技术

载脂蛋白B(apolipoprotein B，apoB)是富含胆固醇和甘油三酯脂蛋白的重要组成成分，对脂质在人体转运、代谢、维持体内脂质水平的恒定起重要作用。载脂蛋白B有二种亚型：apo B 100和apo B 48。apo B 48在小肠中产生，仅见于CM，是apo B100的N-末端部分；apo B100是CM、低密度脂蛋白(LDL)和VLDL的主要结构蛋白质，能够与LDL受体相结合，它对含有apo b的脂蛋白的组装、分泌、降解密切相关，对维持体内血脂水平的恒定起重要作用，其水平升高是动脉粥样硬化主要危险因素之一。 

apo B基因位于人2号染色体短臂上，全长43kb，含有28个内含子和29个外显子。在已知基因中，apo B基因具有最明显的多态性，其核苷酸变异有75处，其中导致氨基酸改变的有54处。 

本发明目标检测的apoB基因SNP位点，如表所示： 

  序号   apoB位点突变的内容   简写   1   SEQ ID NO.42的第181位核苷酸，发生C→T突变   C181T   2   SEQ ID NO.43的第245位核苷酸，发生C→A突变   C245A   3   SEQ ID NO.43的第245位核苷酸，发生C→T突变   C245T   4   SEQ ID NO.43的第153位核苷酸，发生G→A突变   G153A   5   SEQ ID NO.44的第181位核苷酸，发生G→A突变   G82A   6   SEQ ID NO.45的第62位核苷酸，发生G→A突变   G62A

目前，对ApoB基因多态性进行检测、分析的方法很多，如：直接测序法、RT-PCR技术、荧光定量PCR、PCR直接分析法，PCR产物RFLP分析法、等位基因特异性寡核苷酸(ASO)杂交法等等，其中最常用且简单的方法有PCR产物直接分析法和PCR产 物RFLP分析法。PCR产物直接分析法，是采用合适的引物，通过多次扩增，获得靶基因序列扩增片段，直接分析片段的大小，可用于分析基因的缺失与插入；而PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型。但是，这些方法都是基于PCR技术，该技术存在灵敏度低，样品易污染、假阳性率高的缺点，同时由于检测通量的局限性，不能满足实际应用的需要。