[发明专利]应用电泳中介微分析技术分离测定普瑞巴林手性异构体的方法

权利要求书

1.一种应用电泳中介微分析技术分离测定普瑞巴林手性异构体的方法，包括：

A)将手性衍生化试剂溶于可加速双分子亲核取代反应的促进剂中，应用电泳中介微分析技术，依次进样手性衍生化试剂溶液、含普瑞巴林的样品溶液和手性衍生化试剂溶液，再加电压，以电泳为驱动力，使普瑞巴林与手性衍生化试剂因电泳淌度不同而混合，并在毛细管柱头进行衍生化反应。所述手性衍生化试剂为N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-氨基酸类化合物；

B)反应完毕，直接在线对衍生物采用非手性毛细管胶束电动色谱分离测定。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的手性衍生化试剂选自以下任一化合物：N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-丙胺酰胺、N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-苯丙胺酰胺、N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-脯胺酰胺、N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-缬胺酰胺、N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-D-丙胺酰胺、N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-D-苯丙胺酰胺、N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-D-脯胺酰胺、N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-D-缬胺酰胺。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的手性衍生化试剂为N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-丙胺酰胺。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取普瑞巴林或含普瑞巴林的制剂适量，用水溶解并稀释后，配制成含普瑞巴林的样品溶液；

2)取手性衍生化试剂适量，用六甲基磷酰三胺溶解并配制成手性衍生化试剂溶液；

3)取手性衍生化试剂溶液在25mbar压力下进样1～10s，再取含普瑞巴林的样品溶液在25mbar压力下进样4s，最后取手性衍生化试剂溶液在25mbar压力下进样1～10s，每一次进样完毕、下次进样或加操作电压前，应先将毛细管进样端在六甲基磷酰三胺中浸一下，普瑞巴林与手性衍生化试剂的用量摩尔比为1∶1～1∶12；

4)将毛细管两端插入含操作缓冲液的小瓶中，加电压5kV并维持5～10s，使普瑞巴林与手性衍生化试剂混合，停止加电压，使普瑞巴林在45～55℃柱温下进行衍生化反应5～15min；

5)反应完毕，直接加电压进行非手性毛细管胶束电动色谱分离测定。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的步骤2)手性衍生化试剂用可加速双分子亲核取代反应的促进剂溶解。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的步骤3)普瑞巴林与手性衍生化试剂的用量摩尔比为1∶2～1∶5。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的步骤4)加操作电压5kV并维持6～8s使普瑞巴林与手性衍生化试剂混合，停止加电压，使普瑞巴林在45～55℃柱温下进行衍生化反应8～12min。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的非手性毛细管胶束电动色谱使用的毛细管柱是未涂层弹性石英毛细管。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的非手性毛细管胶束电动色谱的检测波长为200～380nm。

10.根据权利要求1～9所述的任一方法，其特征在于所述的非手性毛细管胶束电动色谱使用的操作缓冲液为含十二烷基硫酸钠的硼砂溶液-乙腈体系，所述硼砂溶液的pH值为9.8～10.2。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述的十二烷基硫酸钠的浓度为35～45mmol/L。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述的硼砂溶液与乙腈的比例为92∶8～88∶12。

13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述的硼砂溶液的浓度为65～75mmol/L。

14.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述的硼砂溶液的pH值使用硼酸调节。