[发明专利]具有多种生物活性的螠蛏多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其是一种操作简单、成本低廉，具有多种生物活性的螠蛏多糖的制备方法。

背景技术

螠蛏（Sinonovacula constrictaIamarck）俗名蛏子、青子、竹蚶、海蛏，隶属于软体动物门（Mollusca）、瓣鳃纲（LameUibranchia）、真瓣鳃目（Eulamellibranchia）、蛏科（Pharellidae），是我国与日本特有的种类，也是100多年来我国沿海养殖的重要贝类之一。螠蛏肉味鲜美，营养丰富，蛋白质含量5.5％，脂肪0.8％，糖1.8％和无机盐1.1％。螠蛏的软体部还有补虚的作用，对阴虚、血虚效果最佳，产后、病后多用之。近年来，海洋贝类的研究已引起人们极大重视，海洋贝类中所具有的多种生物活性肽、多糖、不饱和脂肪酸等已成为海洋保健食品和功能食品的重要原材料，如Bordenave等将太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）用胃蛋白酶水解，得到具有抑制ACE能力的水解产物；文蛤（Meretrix meretrix (Linnaeus)）多糖对不同剂量的环磷酰胺(CTX)引起的迟发型超敏反应（DTH）有双向调节功能等。但是，目前关于螠蛏的研究多集中在干制品加工及营养成分分析方面，对其生物活性的研究甚少，产品品种单调，在一定程度上限制了螠蛏养殖业的发展。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种操作简单、成本低廉，具有多种生物活性的螠蛏多糖的制备方法。

本发明的技术解决方案是：一种具有多种生物活性的螠蛏多糖的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：

a. 将螠蛏肉用组织捣碎匀浆机匀浆捣碎装入容器中再加入蒸馏水制成螠蛏肉匀浆液，螠蛏肉与蒸馏水的比重为30 g：120ml；

b. 将螠蛏肉匀浆液置于70 ℃水浴中加热6 h，3000 r/min离心15 min，收集上清液，在上清液中按体积比为1：2加入无水乙醇，4℃静置过夜；

c. 5000 r/min离心20 min，收集沉淀置于培养皿上，自然挥发干燥后收集；

d. 用Sevage法去除所收集固体中的蛋白，然后用丙酮脱色，将所得沉淀置于培养皿中，自然挥发干燥过夜后收集。

本发明是以来源丰富、价格便宜的螠蛏为原料，所提取的螠蛏多糖具有多种活性：抑菌活性、抗氧化活性效果显著，具有一定的诱抗活性，可抑制蚕豆根尖细胞微核形成，并且对人乳腺癌细胞MCF-7有抑制活性。操作简单、成本低廉，适合于大规模生产，可制成海鲜调味料、保健食品、营养食品及天然药物等。

具体实施方式：

本发明实施例依次按如下步骤进行：

a. 将螠蛏肉用组织捣碎匀浆机匀浆捣碎装入容器中再加入蒸馏水制成螠蛏肉匀浆液，螠蛏肉与蒸馏水的比重为30 g：120ml；

b. 将螠蛏肉匀浆液置于70 ℃水浴中加热6 h，3000 r/min离心15 min，收集上清液，在上清液中按体积比为1：2加入无水乙醇，4℃静置过夜；

c. 5000 r/min离心20 min，收集沉淀置于培养皿上，自然挥发干燥后收集；

d. 用Sevage法去除所收集固体中的蛋白，然后用丙酮脱色，将所得沉淀置于培养皿中，自然挥发干燥过夜后收集。

用苯酚-浓硫酸法检验所得固体，结果为多糖。

本发明实施例所得固体（螠蛏多糖）的实验如下：

1．滤纸片法检测抑菌活性：大肠杆菌Escherichia coli （EC）、变形杆菌Proteus vulgaris（PV）、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus（SA）、产气杆菌Enterobacter aerogenes（EA）和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis （BS）用牛肉膏蛋白胨培养基；乳酸菌Lactobacterium delbruckii （LD）用MRS培养基；酿酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae （SC）用YPD培养基，上述菌种均可购自上海坤肯生物化工有限公司。将上述各菌种分别接种于相应的液体培养基中，振荡培养24 h作指示菌。