[发明专利]检测呋喃妥因的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种直接化学发光检测试剂盒及其测试方法，特别是检测饲料样本中呋喃妥因残留量的磁颗粒竞争直接化学发光检测试剂盒。 

技术背景

硝基呋喃类药物是人工合成的广谱抗生素，它有非常好的抗菌作用和药动力学的特性，曾经被广泛应用作为家畜、家禽、人工养殖水产品的促生长添加剂。但通过长期的实验研究发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，并由此推断，人类长期使用该类药物或长期食用添加该类促生长添加剂的家禽、家畜、人工养殖水产品，同样也可以发生癌变和基因突变。所以此类药物禁止在治疗和饲料中使用。 

目前，呋喃妥因残留量的常规检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、超高效液相色谱法(UPLC)和酶联免疫吸附法(ELISA)等。 

1、高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。 

2、超高效液相色谱法(UPLC)，在分析时间和溶剂用量上远远优于液相色谱法，尤其是对基质复杂的痕量组分测定时显示出其良好的优越性。即使这样，UPLC都未能解决仪器造价昂贵，操作步骤繁琐，样本前处理复杂，对操作人员专业素养要求高等问题。 

3、酶联免疫吸附法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性 较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在： 

1)非均相反应：检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。 

2)酶催化反应：借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种呋喃妥因检测试剂盒，采用该试剂盒进行呋喃妥因的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。 

本发明的另一个目的在于提供一种呋喃妥因的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。 

实现上述目的，本发明提供一种呋喃妥因检测试剂盒，其包含的主要试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。 

所述的分离试剂是包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠。 

所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有顺磁性。 

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的呋喃妥因半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。 

所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。 

所述的荧光素标记物是FITC标记的呋喃妥因单克隆抗体。 

本发明还提供一种利用试剂盒检测呋喃妥因的方法，包括下列步骤： 

1)分别吸取20μl-100μl标准品或样本，然后加入20μl-100μl发光标记物，再加20μl-100μl荧光素标记物，充分混匀后，37℃温育15min； 

2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150μl，混匀后 在37℃温育5min； 

3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500μl冲洗复合物沉淀； 

4)上述清洗步骤重复2-4次； 

5)4)所得分离好的复合物直接放入测量暗箱，加入激发底物1和激发底物2，延迟3-5s后检测发出的相对光强度(RLU)，样本中的含量与RLU成一定比例关系，可以通过RLU集合标准曲线法计算呋喃妥因的浓度。 

所述的发光底物的主要成分是NaOH和H₂O₂。