[发明专利]一种制备酶标记抗体的方法

权利要求书

1.一种制备酶标记抗体的方法，其特征在于它将胶体金溶液浓缩，然后将浓缩后的胶体金溶液的pH调到略高于用于标记的酶的等电点的pH，将用于标记的酶的水溶液加入胶体金溶液后混匀，再通过双功能试剂将抗体连接到胶体金表面的酶分子上，经离心后即制得酶标记金胶复合抗体。

2.如权利要求1所述的一种制备酶标记抗体的方法，其特征在于所述用于标记的酶包括辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，半乳糖苷酶或葡萄糖氧化酶。

3.如权利要求1所述的一种制备酶标记抗体的方法，其特征在于所采用胶体金粒子的直径范围在18～60nm之间。

4.如权利要求1、2或3所述的一种制备酶标记抗体的方法，其特征在于所述略高于用于标记的酶的等电点的pH为高于用于标记的酶的等电点0.4-0.6个单位的pH。

5.如权利要求1所述的一种制备酶标记抗体的方法，其特征在于所述双功能试剂为戊二醛或N,N'-二琥珀酰亚胺碳酸酯。

6.如权利要求1所述的一种制备酶标记抗体的方法，其特征在于所述方法包括制备用于标记的酶溶液的步骤，它将用于标记的酶用水配成0.1～2mg/mL的澄清溶液，所述用于标记的酶包括辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，半乳糖苷酶或葡萄糖氧化酶；

所述方法还包括制备胶体金溶液的步骤，所述胶体金溶液通过柠檬酸钠还原氯金酸的方法来制备；

所述方法还包括以下步骤：

(1) 将所制备的胶体金溶液浓缩至原浓度的2倍，将浓缩过的胶体金溶液的pH值调节到适合标记酶的最佳pH范围，即高出用于标记的酶的等电点约0.4-0.6个单位的pH，然后将该胶体金溶液与所述用于标记的酶溶液进行混合，在室温或4°C条件下混合1h；

随后将混合液于15000g 4°C下离心15min，吸走上清液后加入等体积的磷酸盐缓冲液重新溶解，所述磷酸盐缓冲液的pH =7.4，即得到标记有酶的胶体金溶液；

(2) 将步骤(1)所得溶液中加入双功能试剂，所述双功能试剂选自如戊二醛或N,N'-二琥珀酰亚胺碳酸酯，使标记在胶体金上的酶经双功能试剂活化后修饰上功能基团；随后将反应液在15000g 4°C下进行离心，离心后吸走上清液并加入等体积的磷酸盐缓冲液重新溶解，所述磷酸盐缓冲液的pH =7.4，此离心步骤重复进行以去除未参与反应的多余双功能试剂；

 (3) 往步骤(2)所得的产物中加入抗体，抗体的最终浓度为5～50μg/mL，混匀后过夜反应，使抗体连接到标记在胶体金上的酶的活化的功能基团上，随即加入封闭剂封闭掉酶上可能残余的双功能试剂功能基团；然后将产物进行离心后溶于磷酸盐缓冲液中，即制得以胶体金为载体的酶标记抗体。