[发明专利]一种融合蛋白的表达方法及用途无效
| 申请号： | 201010595631.4 | 申请日： | 2010-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN102153652A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 赵同峰;赵江佩;黄晓 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K38/26;A61P3/10;A61K38/17 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高;赵杭丽 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 融合 蛋白 表达 方法 用途 | ||
1.一种具有SEQ ID NO.1氨基酸序列的人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白，全长共183个氨基酸，1-31氨基酸为人胰升糖素样肽-1类似肽，32-46氨基酸为接头肽，47-183氨基酸为人联素球状域。
2.根据权利要求1所述的人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白的表达方法，通过以下步骤实现：
(1)含6×His tag人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白的表达：
(a)构建含人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合基因的原核表达载体PET28a-gAd-GLP-1-A，在gAd-GLP-1-A融合基因的5’端还引入了肠激酶识别序列，
(b)用PET28a-gAd-GLP-1-A转化Escherichia coli BL21(DE3)，加异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导后，证实此载体能很好地表达6×Histag-gAd-GLP-1-A融合蛋白，融合蛋白主要存在于包涵体内，
(c)大量表达6×His tag-gAd-GLP-1-A融合蛋白，收集细菌，超声破碎后，离心，保留沉淀，沉淀为包涵体蛋白；
(2)人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白的获得：
(a)将包涵体蛋白洗涤并溶解后，用High-Affinity Ni-IDA Resin纯化，获得纯化的6×His tag-gAd-GLP-1-A融合蛋白，
(b)将纯化后的6×His tag-gAd-GLP-1-A融合蛋白在尿素梯度溶液中透析复性，
(c)将复性后的6×His tag-gAd-GLP-1-A融合蛋白与肠激酶孵育，切割去除6×His tag，获得gAd-GLP-1-A融合蛋白。
3.根据权利要求1所述的人脂联素球状域-胰升糖素样肽-1类似肽融合蛋白在制备治疗2型糖尿病药物中的应用。
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