[发明专利]曙红及其衍生物在琼脂糖凝胶上DNA负染检测中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及DNA检测技术，具体地说涉及DNA检测的一种新型染料。

背景技术

在生命科学研究领域中，作为生物体内的重要大分子，DNA是研究生命现象与本质的物质基础，特别随着基因组学、功能基因组学和结构基因组学的快速发展，它的应用范围越来越广，主要包括：对特定基因功能的识别、新药筛选、疾病诊断、药物作用机理、生物各个时期的发育变化等方面的研究，它几乎渗透到生命科学的各个领域。因此，对DNA的研究具有重要的意义。目前，琼脂糖凝胶电泳是高效分离和分析DNA分子的一种常用方法，使得凝胶上DNA的检测技术对DNA的相关研究起着至关重要的作用。

测定DNA含量的方法有多种，目前用于琼脂糖上DNA研究和测定的方法有荧光染色法、染料染色法、负染法、银染法等。DNA负染检测法因具有快速便捷、价格低廉、低毒等优点而成为DNA检测研究领域的热点之一。

曙红为砖红色粉术状或酱红色结晶，属于萤光黄的四溴衍生物，是最常用的胞浆染料。到目前为止，还没有将其用于DNA负染检测的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供曙红及其衍生物在DNA负染检测中的应用。

本发明所述的曙红相关化合物是指以曙红为母核的钠盐、钾盐、铵盐等。

曙红母核为：

下面是本发明一个可用的凝胶检测方法，其包括步骤：

1)将经琼脂糖电泳后的DNA样品凝胶置于固定液中固定5-15min，其中所述固定液为含按重量体积比0.1-5％的乙酸锌水溶液，弃固定液；优选的固定时间为10min，优选的乙酸锌浓度为2.5％；

2)加入染色液染色1-60min，其中所述染色液为含按重量体积比0.1-0.5％的曙红或其衍生物及按体积比为30-60％甲醇的水溶液，弃染色液；优选的染色时间为25min，优选的曙红或其衍生物的浓度为0.4％，甲醇浓度为50％；

3)加入显影液显影1-30min，其中所述显影液为含按重量体积比为0.2-10％乙酸锌及0.5-5％柠檬酸的水溶液，优选的显影时间为20min，优选的乙酸锌浓度为2％，柠檬酸浓度为1％，弃显影液。

用曙红作为DNA检测染料具有如下优点：

1)灵敏度高：比普通染料染色的灵敏度高很多倍；

2)操作简单迅速：操作简便，可在50min内完成；

3)重现性好：受温度、摇床摆动频率等外部条件影响较小；

4)染色背景低；

5)线性范围广：能在较大范围内对DNA进行半定量测定；

6)可逆性强；

7)使用安全：采用低毒性的染料，提高实验操作的安全性，对环境污染小；

8)成本低廉。

附图说明

图1.曙红的化学结构；

图2.(A)曙红染色法中，染色前固定10min和不固定对染色结果的影响，其中(a)是不固定的凝胶，(b)是固定10min的凝胶；(B)固定液中乙酸锌浓度对染色结果的影响，乙酸锌浓度分别为：(a)0.5％，(b)1.5％，(c)2.5％，(d)3.5％，(e)4.5％；DNA载样量(每条带)如下：带1，72ng；带2，36ng；带3，18ng；带4，9ng；带5，4.5ng；带6，2.2ng；带7，1.1ng；带8，0.5ng；

图3.(A)曙红浓度对染色效果的影响，曙红的浓度分别为：(a)0.1％，(b)0.2％，(c)0.3％，(d)0.4％，(e)0.5％；(B)染色时间对染色效果的影响，染色时间分别为：(a)10min，(b)20min，(c)30min，(d)40min，(e)50min；DNA载样量(每条带)如下：带1，72ng；带2，36ng；带3，18ng；带4，9ng；带5，4.5ng；带6，2.2ng；带7，1.1ng；带8，0.5ng；

图4.显影液对染色灵敏度及对比度的影响，(A)显影液中乙酸锌浓度对染色结果的影响，乙酸锌的浓度分别为：(a)0.5％，(b)1.0％，(c)2.0％，(d)3.0％，(e)4.0％；(B)显影液中柠檬酸浓度对染色结果的影响，柠檬酸的浓度分别为：(a)0.1％，(b)0.5％，(c)1％，(d)2％，(e)3％；

图5.曙红染色法与其他DNA检测方法灵敏度的比较。DNA载样量(每条带)如下：带1，72ng；带2，36ng；带3，18ng；带4，9ng；带5，4.5ng；带6，2.2ng；带7，1.1ng；带8，0.5ng。

具体实施方式：