[发明专利]叶酸受体靶向的新型脂质体

说明书

技术领域

本发明涉及新型脂质体及其用途。基于神经母细胞瘤中叶酸受体的高表达性与RNA干扰的用途，本发明公开了一种叶酸受体靶向的新型脂质体。并利用细胞生物学技术与免疫学实验对所述脂质体进行了功能验证。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。其机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA(siRNA)，这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。在此基础上发展的RNA干扰技术，是指体外人工合成的或体内的双链RNA(dsRNA)在细胞内特异性的将与之同源的mRNA降解成小片段，使相应的基因沉默的技术[Fire A，Xu S，Montgomery MK，et al.Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.Nature.1998；391：806-811]。首次发现dsRNA能够导致基因沉默的线索来源于线虫Caenorhabditis elegans的研究。现已初步阐明RNAi的作用机制。RNAi的第一步是，dsRNA在内切核酸酶作用下加工裂解形成21～25nt的由正义和反义序列组成的干扰性小dsRNA。即siRNA果蝇中RNase III样核酸酶称为Dicer。Dicer含有解旋酶(helicase)活性以及dsRNA结合域和PAZ结构域。已发现在Arabidopsis，C.elegans，Schizosaccharomyces pombe以及哺乳动物中也存在Dicer同类物。RNAi的第二步是，由siRNA中的反义链指导形成一种核蛋白体，该核蛋白体称为RNA诱导的沉默复合体(RNA induced silencing complex，RISC)，由RISC介导切割靶mRNA分子中与siRNA反义链互补的区域，从而达到干扰基因表达作用。RISC由多种蛋白成分组成，包括内切核酸酶、外切核酸酶、解旋酶和同源RNA链搜索活性等。

叶酸是维生素B复合体之一，相当于蝶酰谷氨酸(pteroylglutamic acid，PGA)，是米切尔从菠菜叶中提取纯化的，故而命名为叶酸。有促进骨髓中幼细胞成熟的作用，人类如缺乏叶酸可引起巨红细胞性贫血以及白细胞减少症，对孕妇尤其重要。叶酸与神经系统疾病紧密相关，叶酸对婴幼儿的神经细胞和脑细胞发育有促进作用；叶酸可作为精神分裂症病人的辅助治疗剂，它对此病有显著的缓解作用。众多的流行病学资料表明，叶酸缺乏与肿瘤发病风险增高相关。叶酸对肿瘤发生有双重调节作用，对已经发生的肿瘤叶酸缺乏可抑制其生长，补充叶酸则促进其发展。叶酸受体(folate receptor，FR)是一种在肿瘤细胞膜表面高表达的细胞因子，在包括胶质瘤在内的恶性肿瘤细胞膜表面其活性和数量显著高于正常细胞。