[发明专利]一种日本脑炎颗粒疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种日本脑炎颗粒疫苗，其特征在于其氨酸酸序列为Seq NO.1。

2.一种日本脑炎颗粒疫苗，其特征在于其核苷酸序列为SeqNO.2。

3.一种日本脑炎颗粒疫苗的制备方法，其特征在于由日本脑炎病毒两个中和抗原表位和一个CTL抗原表位分别通过基因重组技术展示在乙肝病毒核心抗原1-149Aa的中间穗状区和C末段制备获得；

其具体步骤如下：

(1)通过重组PCR的方法或全基因合成方法将日本脑炎病毒囊膜蛋白的中和抗原表位“³²⁷SYSGSDGPCKI³³⁷”和“³⁸⁴VVGRGDKQI³⁹²”的编码基因插入乙肝病毒核心抗原1-149Aa的中间穗状区第78位和79位Aa之间，将日本脑炎病毒囊膜蛋白的CTL抗原表位“⁶⁰ CYHASVTDI ⁶⁸” 的编码基因插入乙肝病毒核心抗原1-149Aa编码基因C末段；

(2)将上述基因插入原核表达载体，并转化大肠杆菌，诱导表达，通过westen-Blot 鉴定获得日本脑炎病毒抗原表位的重组蛋白，通过大肠杆菌裂解上清的电镜观察鉴定表达抗原形成病毒样颗粒；

(3)阳性菌株20℃诱导培养16~18小时，离心收集菌体，用生理盐水稀释为10g/L；超声波裂解破碎菌体，12000rpm离心10分钟收集上清液；用浓度为20%的硫酸胺沉淀蛋白，用0.01M pH7.2 的PBS溶解沉淀，0.22μm滤膜过滤后应用Sepharose CL-4B层析柱纯化病毒样颗粒抗原,其氨基酸序列为Seq NO.1。

4.根据权利要求3所述的一种日本脑炎颗粒疫苗的制备方法，其特征在于所述的嵌合日本脑炎抗原表位的乙肝病毒核心抗原在大肠杆菌中低温可溶性表达时能自发形成病毒样颗粒。

5.一种日本脑炎颗粒疫苗的应用，其特征在于将日本脑炎颗粒疫苗用适量生理盐水稀释或与免疫佐剂配伍，用于人或易感动物日本脑炎的免疫预防。