[发明专利]利用纤维素酶发酵废菌丝体和沼渣生产生物钾肥的方法

权利要求书

1.一种利用纤维素酶发酵废菌丝体和沼渣生产生物钾肥的方法，其特征是它是由如下步骤组成：(1)沼渣的预处理：采用纤维素酶发酵废菌丝体与沼渣混合，利用其中的纤维素酶活力水解沼渣中的纤维素；(2)固态发酵培养基的配制：预处理好的沼渣连同其中的纤维素酶发酵废菌丝体与尿素，过磷酸钙，氯化钾，磷酸二氢钾，钾矿粉混合，初始含水量60％-80％，pH 6-8；(3)环状芽孢杆菌及胶冻样芽孢杆菌的培养：均为将经斜面培养的菌体接种入摇瓶后培养获得摇瓶种子，再将摇瓶种子接种到发酵罐中进行放大培养得到二级种子；(4)固态发酵生产生物钾肥：将环状芽孢杆菌液体种子液和胶冻样芽孢杆菌种子液分别用无菌水稀释成10亿个/毫升，按照比例接入固态发酵培养基中；接种后在发酵池中混合均匀，发酵时间为2-8天；(5)干燥。

2.根据权利要求1所述的利用纤维素酶发酵废菌丝体和沼渣生产生物钾肥的方法，其特征是所述纤维素酶废菌丝体是指，纤维素酶液态发酵结束后经过滤处理所得到的真菌菌丝体。

3.根据权利要求2所述的利用纤维素酶发酵废菌丝体和沼渣生产生物钾肥的方法，其特征是所述真菌是指曲霉、青霉或者木霉。

4.根据权利要求1所述的利用纤维素酶发酵废菌丝体和沼渣生产生物钾肥的方法，其特征是所述沼渣是指沼气发酵过程中排放的废弃物经固液分离后所得的固体组分。

5.根据权利要求1所述的利用纤维素酶发酵废菌丝体和沼渣生产生物钾肥的方法，其特征是所述钾矿粉是指钾长石矿粉、霞石矿粉、杂卤石矿粉、明矾石矿粉一种或几种的混合物。

6.一种利用纤维素酶发酵废菌丝体和沼渣生产生物钾肥的方法，其特征是它由如下步骤组成：(1)沼渣的预处理：纤维素酶废菌丝体1-5份，沼渣2-6份，在发酵池中充分混合后调节含水量为50％-70％w/w，调节pH为4-6，于20℃-50℃条件下处理1-5天，其间翻料3-8次；

(2)固态发酵培养基的配制：预处理好的沼渣连同其中的纤维素酶发酵废菌丝体100-200份，尿素3-8份，过磷酸钙5-10份，氯化钾0-3份，磷酸二氢钾2-5份，钾矿粉10-20份，初始含水量60％-80％，pH 6-8；上述培养基经121℃灭菌30分钟后备用；

(3)环状芽孢杆菌及胶冻样芽孢杆菌的培养：

①所述环状芽孢杆菌的培养：

斜面培养基：蛋白胨1，牛肉膏0.3，氯化钠0.5，琼脂2，水100，pH 7.0；菌体在上述斜面培养基上于培养箱中32℃培养至斜面长满后用于环状芽孢杆菌的大量制备；

液体培养基：淀粉5，蔗糖1，CaCO₃1，FeCl₃0.1，豆饼粉0.5，硫酸铵2，磷酸二氢钾1，硫酸镁0.5，自来水1000，pH 7.2；

摇瓶种子培养：摇床培养条件为：转速200转/分，温度35-40℃，培养时间20-30小时获得摇瓶种子；

发酵罐种子培养：以10％v/v接种量向发酵罐中接入摇瓶种子，转速300-400转/分，培养温度35-40℃，溶氧控制在20％以上，通气量为1∶1以装液量为基准的体积比，培养15-28小时获得二级种子；

②所述胶冻样芽孢杆菌的培养：

斜面培养基：蔗糖10，磷酸二氢钠2，硫酸镁0.5，硫酸铵2，氯化铁0.05，碳酸钙1.0，酵母粉2，琼脂20斜面，水1000，pH 7.0，121℃灭菌30分钟；菌体在上述斜面培养基上于32℃培养箱培养至斜面长满后用于液体摇瓶种子制备；

液体培养基：淀粉7，蔗糖1，CaCO₃1，FeCl₃0.1，豆饼粉0.5，硫酸铵2，磷酸二氢钾1，硫酸镁0.5，自来水1000，pH 7.2；

摇瓶种子培养条件为：摇床转速200转/分，温度30-35℃，培养时间10-15小时获得摇瓶种子；

发酵罐种子培养：以10％v/v接种量向发酵罐接入摇瓶种子，转速300-400转/分，培养温度30-35℃，溶氧控制在20％以上，通气量是以装液量为基准的体积比1∶1，培养15-24小时获得二级种子；

(4)固态发酵；将环状芽孢杆菌液体种子液和胶冻样芽孢杆菌种子液分别用无菌水稀释成10亿个/毫升，按照如下比例接入固态发酵培养基中；固态发酵培养基的配制方法见步骤(2)；

环状芽孢杆菌种子液5-10，胶冻样芽孢杆菌5-10，固态发酵培养基100-250；接种后在发酵池中混合均匀，控制温度为25-40℃，湿度为90％-95％，发酵时间为2-8天，其间翻料3-10次；

(5)干燥；固态发酵结束后，将所得发酵肥料于40-60℃条件下烘干或者晒干，控制其含水量在20-30％即可获得生物钾肥产品。