[发明专利]一种新的HIV重组多表位融合抗原及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学及免疫学领域，涉及一种重组融合蛋白，包含编码该蛋白的DNA序列的载体构建和工程菌构建以及该重组融合蛋白的免疫学应用。 

背景技术

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)引起的一种疾病。1981年，人类免疫缺陷病毒在美国首次发现。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒(Lentivirus)，属反转录病毒的一种。至今无有效疗法的致命性传染病。该病毒破坏人体的免疫能力，导致免疫系统的失去抵抗力，而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，发展到最后，导致艾滋病(获得性免疫缺陷综合征)。 

当前全球208个国家和地区已受到艾滋病严重威胁，3320万人受到HIV的感染，700多万人患了AIDS，200多万已经死亡。150万儿童成为受害者，60万儿童已病死。目前每天正以6000个新感染HIV者速度向前发展。 

中国自1985年首次报告艾滋病病例以来，艾滋病的流行呈快速上升趋势。近年来，中国艾滋病的感染与发病人数也增长较快。据联合国驻华机构公布的数据，目前中国艾滋病病毒感染者约84万人，加上已经染病死亡的24万人，总数应该在100万人左右。根据世界卫生组织统计，目前中国艾滋病病毒感染者占总人口的比例虽然很低，但感染人数在亚洲位居第2位，在全球居第14位。 

长期以来，中国政府高度重视艾滋病防控工作。2010年11月29日召开的国务院常务会议更是明确指出，预防和控制艾滋病，关系到人民群众身体健康和经济社会发展，关系到民族兴衰和国家存亡。 

目前艾滋病的防治主要为疫苗、诊断和治疗这三个方面，HIV疫苗的研制至今仍未获得成功，而HIV的治疗不仅价格昂贵，而且效果极其有限，这使得HIV的诊断成为艾滋病防治的最基础最有效的手段。 

自1985年第一代ELISA试剂问世以来，随着医学技术的飞速发展，包被抗原已从第一 代的全病毒裂解物发展为目前以基因重组与多肽抗原包被和标记的有着良好敏感性和特异性的第三代双抗原夹心试剂，检测亚型包括HIV-1、HIV-2和HIV-1型的O亚型，窗口期由10周缩短至3～4周。为避免窗口期传染，荷兰、法国等国已研制出可同时检测抗原抗体的第四代ELISA筛查试剂，但其临床价值有待评估。 

决定检测试剂的质量最重要因素就是检测抗原的质量，本发明一种新的HIV重组多表位融合抗原融合抗原在免疫试剂上的应用减少了不必要的基因序列能使临床检测的非特异性反应减少50％以上，而同一个抗原上多个抗原表位的协同作用能使检出的灵敏度增加2-3倍。 

发明内容

艾滋病在世界许多地区传播迅猛，常由最初的几例经十多年的传染就可达上百万至数百万例的感染。有效的诊断极其重要，一例的漏检、误诊就可能造成十年后的大面积传播。高效的诊断依赖于高质量的抗原。本发明是将艾滋病毒各型主要表位融合的重组抗原可以高效地检测出病人抗HIV病毒的抗体。本发明的HIV重组多表位融合抗原减少了很多不必要的蛋白序列，从而大大减少了非特异性吸附，不易漏检，多个主要抗原表位的融合大大提高了与抗HIV抗体反应的灵敏性，融合抗原与抗体可变区的嵌合较分别检测提高了效率，更重要的是增强了试剂稳定性，减少了批间、不同操作条件下的误差，从而建立了艾滋病高效诊断的基础。 

本发明根据蛋白质的结构特性和抗原的免疫学知识，采用计算机辅助设计，将第三代艾滋病重组抗原HIV-1 gp41、″M″组和″O″组的主要表位基因、HIV-1 gp120主要表位基因和HIV-2 gp36主要表位基因加以柔性结构基因，全部基因DNA联一起的一条人造基因序列。将此序列克隆到表达载体再异位表达，建立免疫活性高表达细胞株。最后发酵培养、诱导高效表达，层析分离纯化艾滋病病毒多抗原表位融合抗原，因融合抗原减少了不必要的基因序列能使非特异性反应减少50％以上，而同一个抗原上多个抗原表位的协同作用能使检出的灵敏度增加2-3倍。应用本发明抗原的HIV的检测试剂将具有更高的检出灵敏度和更好特异性。 

具体实施方式：

1、HIV多表位融合抗原基因的克隆和表达质粒的构建 

(1)设计引物 

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P2：5’-ttaggaggccacctccgagttcattcttttcttg-3’(SEQ ID NO.12)