[发明专利]用于检测酒精性肝病易感性的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病易感性检测用的试剂盒，尤其是一种检测酒精性肝病易感性的试剂盒，通过检测ADH2、ALDH2、CYP2E1的单核苷酸多态性位点(SNP)，来预测个体对白血病的易感性。

背景技术

酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)是由于长期饮酒导致的肝损害，表现为3种形式，即酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬化。这三种形式可单独或混合存在。据统计，全世界约有1500万-2000万人酗酒，其中约10％-20％(150万～400万)有不同程度的酒精性肝病。在我国，随着人民生活水平的不断提高，经济条件的改善，近年来ALD的发病率也呈逐年上升趋势，酒精已成为继病毒之后导致肝损伤的第二大原因。

饮酒后乙醇主要在小肠吸收，其中90％～95％在肝内代谢。乙醇在肝脏内被胞质内的ADH和微粒体内的CYP2EI为主的微粒体乙醇氧化系统分解为乙醛。在通常情况下，以ADH为主起作用；而慢性习惯性饮酒者摄入酒精后则诱导CYP2EI，乙醇由CYP2EI进行代谢。生成的乙醛，主要经过ALDH代谢为乙酸，后者进入三羧酸循环，代谢为二氧化碳和水。ADH、ALDH和CYP2EI均有遗传多态性，不同基因个体表达的酶活性不同，因而影响机体对乙醇的敏感性。

迄今为止，ADH已明确有7种同工酶(ADH1～7)，其中ADH2在肝脏的酒精代谢过程中起着重要的作用。人类ADH2基因位于4号染色体，有3个等位基因：ADH2*1型等位基因在欧美血统人群中最为常见，其表达产物缺乏乙醇脱氢酶活性，诱导代谢乙醇的能力较低；ADH2*2型等位基因最常见于亚洲血统人群，其表达产物的生物活性是ADH2*1的40倍，因此具有ADH2*2基因型酶的个体代谢乙醇的速度快。ADH2*3仅见于非洲血统的人群。ADH2*2基因型个体乙醇代谢速度较快，容易引起其代谢产物乙醛的蓄积，体内过量的乙醛不仅可以直接损害肝细胞，导致脂肪在肝细胞内堆积，还可以通过激活Kupffer细胞生成大量细胞因子而引起炎症。

人类ALDH基因家族中有12个成员，其中ALDH2是和嗜酒密切相关并具有多态性的主要代谢酶，在亚洲人群有高度遗传多态性。ALDH2基因位于染色体12q24.2，有2个等位基因ALDH2*1和ALDH2*2。ALDH2*1为野生型，表达产物具有生物活性，而ALDH2*2基因型在第12外显子出现碱基替换(G→A)导致ALDH2第487位发生谷氨酸和赖氨酸的替换，从而使ALDH2丧失酶活性，使乙醛在体内蓄积，体内过量的乙醛会增加ALD的患病风险。

微粒体乙醇氧化系统是一组混合功能的氧化酶系，其催化作用有赖于细胞色素P450的参与，其中CYP2EI与酒精代谢密切相关，被认为是酒精性肝病的易感基因。CYP2EI基因位于人类第10号染色体上，长11413bp，包括9个外显子和8个内含子。CYP2EI基因存在6种限制性内切酶片段长度多态性：Tap I、Rsa I、Dra I、Msp I多态以及5’-端调控区的Rsa I和Pst I多态。其中位于-1019bp位点的5’-端调控区Rsa I位于转录因子结合区域，可能影响基因表达，当发生点突变C→T时，导致肝脏CYP2EI的转录增加，从而促进乙醇代谢，产生损伤肝脏的活性氧物质，与酒精性肝损害有关。

现有技术检测酒精性肝病易感人群，采用杂交芯片法或玻璃板芯片法，以及利用taqman探针，该方法准确率低、假阴性和假阳性率较高，且不能批量检测；另一种直接测序法，虽准确率高，但其成本高、同样不能实现批量检测，因此现有方法均无法满足大规模基因筛选的要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，通过检测一组与酒精性肝病易感性相关的基因及位点，利用特异性引物和探针，通过单核苷酸延伸技术结合微阵列芯片技术，综合检测和分析受检人群是否携带“酒精性肝病易感基因”，将酒精性肝病易感人群从人群中筛选出来，改变不良的生活习惯，达到预防的目的。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于检测酒精性肝病易感的检测试剂盒，它包括与酒精性肝病关系密切的三个基因的组合：乙醇脱氢酶的ADH2基因、乙醛脱氢酶的ALDH2基因和细胞色素P4502E1的CYP2E1基因。

包括下述SNP位点：ADH2基因的rs1229984位点、ALDH2的rs671位点和CYP2E1的rs2031920位点。

所述的用于检测酒精性肝病易感的基因组合，用于针对所述位点设计特异性的引物对和探针。