[发明专利]一种用于治疗肝硬化的干细胞制剂

说明书

技术领域

本发明属于干细胞与组织工程领域，涉及间充质干细胞的新用途，尤其是涉及人脐带胎盘来源的间充质干细胞用于治疗肝硬化的干细胞制剂。

技术背景

肝硬化是各种原因所致的肝脏慢性、进行性的弥漫性改变，由多种原因引起的肝纤维化发展而来，包括病毒性肝炎、血吸虫感染、慢性酒精中毒、代谢和遗传性疾病、肝脏瘀血、胆汁淤积、循环障碍、肠道感染、营养不良、药物或化学毒物等。我国主要以病毒性肝炎为主，其次为血吸虫病，但酒精性肝硬化有增高趋势。肝硬化早期经过积极防治后可以逆转或不再进展，而晚期将严重影响患者的生活质量，甚至危及生命，目前临床上对其治疗手段极其有限，多为对症治疗。原位肝移植是治疗终末期肝硬化的有效手段，但供体缺乏、费用昂贵，而且移植后需长期服用免疫抑制剂，因此需要积极寻找有效的治疗方法。

近年来，干细胞可塑性研究为各种疾病的治疗提供了一种新的手段。国内外均已证明在特定的条件下，造血干细胞和间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)在体内、体外特定诱导条件下均可转化为肝细胞样细胞，并能行使肝细胞的功能。随着研究深入，业已证实造血干细胞转化为肝细胞的可能性较小。MSCs是来源于发育早期中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中，如骨髓、脐带血、胎盘、脐带与脂肪组织等。与造血干细胞相比，MSCs来源广泛、扩增效应强、无致瘤性、组织相容性强(经数代培养后组织相容性I类和II抗原不表达或弱表达，适宜于异体间干细胞移植)。此外，MSCs可在体外培养扩增，可塑性强，并能在特定诱导条件下还可向成纤维细胞、肝细胞、脂肪细胞、心肌细胞、成骨和软骨细胞、神经细胞、内皮细胞等分化，随着对MSCs生物学特性及功能的深入研究，目前已经从多种组织中分离出MSC，更因其扩增迅速，免疫原性低，易于转染外源基因等优点成为实施细胞治疗的理想细胞，有着广阔的临床应用前景，已成为当今干细胞移植和组织再生工程研究的热点。

动物实验和临床试验结果表明，骨髓间充质干细胞对肝硬化具有一定疗效。Yamamotoet al用Liv8-抗体将骨髓干细胞分选成造血干细胞和非造血干细胞两部分，然后分别Liv8-阳性和阴性的骨髓干细胞分别植入肝损伤的小鼠体内。4wk后，对照发现Liv8-阴性亚群的骨髓干细胞(非造血干细胞)能更有效地向肝细胞方向分化。Lee et al采用阴性免疫分选系统高效分离出人间充质干细胞(hMSCs)，并且首次采用HGF和Oncostain M二步诱导法体外培养hMSCs。4wk后可以看到细胞呈立方形和肝细胞特异的基因标记，并且具有正常肝细胞功能特性，包括合成白蛋白、贮存糖原、分泌尿素、摄取低密度脂蛋白，具有巴比妥诱导的细胞色素P450活性等。

在临床试验研究方面，Terai et al报道了9名接受从周围静脉输注自体骨髓细胞治疗的肝硬化患者，在移植24wk后，血清白蛋白、总蛋白水平明显改善(P＜0.05)，显著改善Child-Pugh分级(P＜0.05)，并未观察到任何副作用。朱康顺等报道36例肝硬化失代偿期患者肝内移植自体骨髓干细胞，移植术后2个月、3个月，ALT、TB和PT均较术前明显改善(P＜0.05)，而ALB直到术后3个月才明显好转(P＜0.05)。5例患者移植术后腹水加重，1例因腹腔感染并肝功能衰竭死亡，1例因上消化道大出血死亡。移植后2个月腹水减轻的占70.8％(17/24)，乏力好转的占83.9％(26/31)，食欲改善的占90.3％(28/31)。移植术中和术后，未见明显不良反应和并发症发生。据此认为，自体骨髓干细胞肝内移植治疗失代偿期肝硬化是一种安全的治疗措施，可起到暂时性的肝脏支持作用。

MSCs目前国内用于肝硬化试验治疗的多为自体骨髓MSCs。近年来研究表明脐带胎盘间充质干细胞有着潜在的临床应用前景和商业价值，比骨髓间充质干细胞更具优势：(1)为废物利用，来源更为容易，供者无痛苦，对母婴均无损害；(2)MSCs的含量丰富，CFU-F的形成率高，而骨髓中MSCs含量低，约为0.001％-0.01％，且随着年龄的增加细胞数量逐渐减少；(3)扩增效应更强，一根脐带的理论扩增细胞数量可达1010以上，可满足临床需要，更具商业药用价值，而骨髓MSCs扩增4代后，扩增效果明显下降；(4)经数代培养后组织相容性I类弱表达或不表达，而II类抗原不表达，更适宜于异体间干细胞移植。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人脐带胎盘来源的间充质干细胞用于制备治疗肝硬化的制剂的用途。