[发明专利]新型抗生素纳米生物传感器的制备方法

权利要求书

1.一种新型抗生素纳米生物传感器的制备方法，其特征在于：

使用的实验材料和仪器：

p<100>单晶硅片，其电阻率O.15～0.2Ω·cm；

牛血清白蛋白(BSA)；

0.2mol/L pH＝7.0的PBS缓冲液；

四环素；

双氧水；

氨水；

3-氨丙基三乙氧基硅烷；

制备实验方法：

多孔硅的制备与氧化膜的形成

选择p<100>单晶硅片通过阳极电化学脉冲腐蚀制备多孔硅，控制脉冲频率为20HZ，脉冲幅度为8mv，占空比为0.5，腐蚀时间1h，该腐蚀过程在自制的聚四氟乙烯容器中进行，选择铂柱电极为阴极，硅片为阳极；腐蚀液体积比为V(48％HF)∶V(无水乙醇)∶V(H₂O)＝1∶1∶2；

刚制备好的多孔硅片用去离子水冲洗，用0.5％(V/V)的双氧水做电解液进行阳极氧化，处理20min，使多孔硅表面形成一层很薄的氧化膜，然后将多孔硅片浸入V(NH₃)∶V(H₂O₂)∶V(H₂O)＝1∶1∶10组成的混合溶液中，70℃，保温20min，进行亲水化处理，以改变多孔硅表面的氧化层的疏水性，同时使多孔硅表面更加均匀；处理完毕后用蒸馏水冲洗干净，在真空干燥箱中200℃干燥处理1h；

适配子的固定化：

用APTES修饰多孔硅表面；将APTES与去离子水按1∶10的比例混合，用1mol/L的HCl溶液调整此混合液的pH为7.0；混合液在53℃恒温水浴，把制备好的多空硅片浸入上述溶液中，反应3h；然后用去离子水冲洗干净，在真空干燥箱中干燥处理；

取10μL2.5％的戊二醛溶液铺展于上述APTES修饰过的多孔硅片上，室温环境2h，使其充分反应；然后用去离子水冲洗，室温晾干；将5ng/μL的四环素适配子溶液10μL铺展于上述修饰过的多孔硅片上，室温过夜，使其充分反应，然后用去离子水冲洗；用2.0mg/mL BSA溶液封闭多孔硅的空白位点；之后用大量pH 7.0的PBS溶液冲洗，储存于真空干燥器中；

交流阻抗法测：

电化学检测采用三电极体系：由多孔硅传感器作为工作电极，铂柱电极作为对电极，Ag/AgCl作为参比电极：在电化学交流阻抗法测量中，频率扫描的范围选择0.01～100kHz，在开路电位下从高频100kHz开始扫描，扫描速度5mV/s，在ZAHNER Im6/6ex电化学工作站上进行测量；

待测物的检测：

待测物溶液即盐酸四环素溶液由PBS缓冲液配制而成；由于多孔硅材料的重复性，将待测物逐级滴加到检测体系中，使待测物的浓度逐渐提高；在电化学系统稳定1h之后，每隔15min向体系中滴加1次待测物，使其质量浓度逐级达到2.079～207.9nM，分别检测各个质量浓度对应的交流阻抗谱。