[发明专利]一种制备醋酸阿托西班的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽药物的制备方法，尤其涉及醋酸阿托西班的制备方法。

背景技术

阿托西班，英文名:Atosiban, 阿托西班是一个九肽，肽链中包含三个非天然氨基酸D-Tyr(Et),Mpa和Orn及一对在Mpa与Cys之间成环的二硫键,其结构式:

c[Mpa-D-Tyr(Et)-IIe-Thr-Asn-Cys]-Pro-Orn-Gly-NH₂。

阿托西班是一种可以直接与催产素竞争催产素受体，抑制催产素和催产素受体结合，从而直接抑制催产素作用于子宫，抑制子宫收缩; 也可以抑制磷脂酰肌醇的水解作用，阻断第二信使的生成以及Ca²⁺的活动，从而间接抑制子宫对催产素的反应，使子宫收缩得到抑制。

目前国内外均有报道关于阿托西班合成工艺方法；国内最近也用相关报道,采用固相氧化,简化了工艺,但所得粗品纯度低,收率不高, 应用价值不高。国外关于阿托西班合成工艺的报道，大多是采用Boc固相合成路线,液氨切肽，再采用液相氧化,纯化得醋酸阿托西班,其操作复杂，产生大量三废,不利于工业生产,见专利US4504469。

发明内容

本发明提出了一条较适当的路线，使用合成线性阿托西班，且通过液相氧化得到阿托西班，该方法解决了线性阿托西班难溶问题,最大可能的缩小了反应体积及减少了反应时间 ,该方法收率高,易工业化。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一种制备醋酸阿托西班的方法，包括以下步骤：

合成获得线性阿托西班；

将线性阿托西班溶于乙腈水溶液中,用氨水调节pH,加入H₂O₂氧化，过滤,纯化，转盐,得到醋酸阿托西班。

所述的“合成获得”，是指液相合成法或固相合成法获得线性阿托西班。优选固相合成法，由Fmoc-Gly -OH和合适替代度的氨基树脂出发，然后采用逐一偶联的方式合成得到线性阿托西班- 树脂；然后用TFA和H₂O混合的裂解液将线性阿托西班- 树脂加入进行裂解切割, 沉淀得到线性阿托西班；其中，氨基树脂优选Rink amide 树脂,其替代度优选为0.4mmol/g —1.0mmol/g。所述固相合成法采用的偶联剂包括DIC/HOBt、PyBOP/HOBt、HATU/HOBt或HBTU/HOBt，优选DIC/HOBt。实验发现，本发明的偶联剂能够明显提高反应速率,同时DIC/HOBt偶联体系极大的降低生产成本。其中“/”表示“和”的含义。所述裂解切割线性阿托西班- 树脂是由线性阿托西班- 树脂经过体积比为TFA:H₂O=95:5的混合裂解液切割。裂解液用量是每克线性阿托西班-树脂用10-15ml的裂解液。

线性肽氧化可采用液相氧化或固相氧化，传统的液相反应体积大,时间长,不易操作; 固相氧化一般采用碘氧化,固相法可以操作方便，但易产生三废。

本发明采用了H₂O₂为氧化剂的液相氧化，本发明直接简化了生产工艺，最大可能的减少了反应体积及氧化时间。

将得到的线性阿托西班溶于乙腈水溶液中,用氨水调节PH值,加入H₂O₂氧化后过滤,再经过纯化、转盐，冻干得到醋酸阿托西班。

液相氧化采用乙腈的水溶液, 乙腈占的体积的 5%-15%,优选10%。线性阿托西班不易溶于水中,采用水为溶剂时反应体积大,本发明采用乙腈的水溶液极大的提高了线性阿托西班的溶解度,可以使反应体积减半。

液相氧化采用线性阿托西班浓度为0.01-0.03g/ml,优选0.02g/ml。线性阿托西班浓度直接影响氧化时多聚体的产生,浓度小于0.01g/ml给工业化带了操作上的不方便,浓度大于0.03g/ml时,发现性肽分子间发生聚合,并且不易过滤。

液相氧化采用H₂O₂为氧化剂, H₂O₂ 用量与线性阿托西班的摩尔比为2-8，即氧化剂H₂O₂ 用量是线性阿托西班摩尔数的2至8倍,优选5倍。实验证明适量的H₂O₂可以加快氧化速度,并减少聚合物的产生。