[发明专利]裂谷热病毒荧光定量PCR检测新方法及裂谷热病毒检测PCR体系

权利要求书

1.裂谷热病毒荧光定量PCR检测新方法，其特征在于，该方法中设计采用的引物探针为：

  Name  Sequence  Position  Tm℃  Modification  FP  CATGGATTCTATATTATCAAAACAGC  18-43  57.3  RP  AATGTTGGAAGTGCCAGAGTTAG  100-122  58.2  Probe  TGGTTTTGTTAGAGTGCCAATCAAGCA  57-83  68.2  HEX/BHQ-1

2.如权利要求1所述的裂谷热病毒荧光定量PCR检测新方法，其特征在于，该方法具体为：

1)设计引物探针；

2)根据仪器选择荧光素；

3)合成引物和探针；

4)制备阳性质粒标准品；

5)运行PCR；

6)数据分析；

7)提取病毒RNA进行体系验证。

3.如权利要求2所述的裂谷热病毒荧光定量PCR检测新方法，其特征在于，所述步骤2)中荧光素的供选择的荧光发射基团有6-FAM、TET、HEX、JOE、CY3、CY5、TAMRA、Texas Red，荧光淬灭基团有BHQ-1、BHQ-2、Lowa BlackTMRQ、Lowa BlackTMFQ、Dabcyl。

4.如权利要求2所述的裂谷热病毒荧光定量PCR检测新方法，其特征在于，所述步骤4)中采取基因合成方式制作阳性质粒CBG234-3作为阳性样品：将引物设计过程中筛选出的高保守区域bp18-bp122前后分别延长10～50bp进行基因合成，然后将其克隆至pMD19-T载体中，即为所述阳性质粒样品，编号CBG234-3。

5.如权利要求2所述的裂谷热病毒荧光定量PCR检测新方法，其特征在于，所述步骤5)中荧光定量PCR反应适用于所有荧光定量PCR反应仪。

6.如权利要求5所述的裂谷热病毒荧光定量PCR检测新方法，其特征在于，所述荧光定量PCR仪包括SmartCyclerII、ABI实时PCR系统、BioRad实时PCR检测系统、Stratagene定量多聚酶链反应仪。

7.如权利要求1所述的裂谷热病毒荧光定量PCR检测新方法，其特征在于，所述步骤5)中最佳扩增条件为：