[发明专利]基孔肯雅病毒荧光定量PCR检测新方法及基孔肯雅病毒检测PCR体系

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及基孔肯雅病毒的快速定性和定量检测方法及基孔肯雅病毒检测PCR体系，提供一对特异性引物和探针。

背景技术

基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒(Chikungunya virus)引起的一种急性自然疫源性传染病，属披膜病毒，蚊虫为传染媒介。该病传播途径主要是受感染的动物(非洲绿猴、狒狒、黑猩猩、牛、马、猪、兔等)和病人通过埃及伊蚊、非洲曼蚊、非洲伊蚊、棕翅曼蚊等吸血传播，也可经呼吸道传播。基孔肯雅热多次发生于非洲以及亚洲的印尼、菲律宾、泰国、越南、缅甸和印度等地。由于国内外人口的流动，基孔肯雅热也逐步传入中国，1987年云南西双版纳曾发现基孔肯雅病例，并从其血液中分离出该病毒。目前用于基孔肯雅病毒的检测方法已经有ELISA、免疫层析、免疫荧光抗体测定(IFA)、病毒分离、RT-PCR和Real-time PCR等核酸扩增法，荧光定量PCR核酸检测的方法不失为公认的一种更直观、更快速的一种适合早期诊断的检测标准。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基孔肯雅病毒荧光定量PCR检测新方法及基孔肯雅病毒检测PCR体系，该方法能够快速定性和定量检测基孔肯雅病毒，包括一对特异性更高、灵敏度高、重复性好的引物和探针。

为实现上述目的，本发明基孔肯雅病毒荧光定量PCR检测新方法，该方法中设计采用的引物探针为：

  Name   Sequence   Position   Tm℃   Modification   FP   GAACACGTAACAGTGATCCCG  9999-10019   57.8    RP   GTAATCAAGCGATAGCGTTGG  10114-10134   58.0    Probe   TGGGAGTACCGTATAAGACTCTAGTCAACAGA  10028-10059   67.0   CY5/lowa Black

进一步，所述的基孔肯雅病毒荧光定量PCR检测新方法，具体为：

1)设计引物探针；

2)根据仪器选择荧光素；

3)合成引物和探针；

4)制备阳性质粒标准品；

5)运行PCR；

6)数据分析；

7)提取病毒RNA进行体系验证。