[发明专利]盐酸哌替啶检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物学免疫方法的测定技术领域，特别是涉及一种利用胶体金免疫层技术制作的一种盐酸哌替啶检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

杜冷丁学名哌替啶，又称作唛啶、德美罗、地美露，又称盐酸哌替啶。其盐酸盐为白色、无嗅、结晶状的粉末，能溶于水，一般制成针剂的形式。作为人工合成的麻醉药物，杜冷丁普遍地使用于临床，它对人体的作用和机理与吗啡相似，但镇痛、麻醉作用较小，仅相当于吗啡的1/10-1/8，作用时间维持2-4小时左右。主要作用于中枢神经系统，对心血管、平滑肌亦有一定影响。毒副作用也相应较小，恶心、呕吐、便秘等症状均较轻微，对呼吸系统的抑制作用较弱，一般不会出现呼吸困难及过量使用等问题。

杜冷丁连续使用可成瘾，连续使用1-2周便可产生药物依赖性。研究表明，这种依赖性以心理为主，生理为辅，但两者都比吗啡的依赖性弱。停药时出现的戒断症状主要有精神萎靡不振、全身不适、流泪流涕、呕吐，腹泻、失眠，严重者也会产生虚脱。一旦停药后则会产生相似于吗啡戒断后的戒断综合症。杜冷丁成瘾的患者部分是因为治疗某些疾病而逐渐上瘾的，属于处方药成瘾，不属于吸毒。杜冷丁滥用就会成瘾，成为毒品，严重危害人体健康和生命安全。1987年11月28日，国务院发布《麻醉药品管理办法》，将杜冷丁列入其中进行严格管理。

有关盐酸哌替啶的检测方法有很多，例如：高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、高效薄层色谱法(HPTLC)等方法，这些方法虽然检测的灵敏度较高，检测结果准确，但是存在需要昂贵的仪器设备，对检测材料的要求高，需要提纯处理等限制。因此研究具有快速、便携等优点的检测方法具有现实意义。本发明介绍了一种以胶体金免疫层析法快速检测盐酸哌替啶的检测试剂盒及其制备方法，该方法具有简单、快速，无需任何仪器设备，经济实用等特点，适用于快速定性检测样本中是否含有盐酸哌替啶。

胶体金免疫层析技术是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、免疫层析技术及胶体金显色技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。基于胶体金免疫层析技术可以制备胶体金试纸，胶体金试纸的原理是应用胶体金标记技术，以胶体金为示踪物，利用抗原抗体特异性结合反应，利用特定的显色反应在试纸上的显色而判定检测的结果，具有操作简单、检测快速、灵敏度高、特异性强，无须复杂的仪器等特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单、快捷、灵敏度高、特异性强的盐酸哌替啶试剂盒及其制备方法，用于检测待检样本中是否含有盐酸哌替啶。

一种用于检测盐酸哌替啶的检测试剂盒，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸样垫和PVC支撑板，在PVC支撑板上依次紧密粘附有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫。所述样品垫为玻璃纤维；所述胶体金垫为胶体金标记的盐酸哌替啶单克隆抗体聚酯膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有检测线(T线)和质控线(C线)，其中检测线(T线)上包被了盐酸哌替啶-牛血清蛋白偶联抗原，质控线(C线)上包被了羊抗鼠IgG多克隆抗体；所述吸样垫为吸水纸。

本发明采用纳米胶体金技术及抗原抗体特异性反应，应用免疫竞争抑制反应的原理制备而成，通过待检样本中含有的盐酸哌替啶与硝酸纤维素膜上检测线(T线)包被的盐酸哌替啶-牛血清蛋白偶联抗原竞争结合胶体金标记的盐酸哌替啶单克隆抗体，通过T线的显色来判定待检样本中是否含有盐酸哌替啶。

本发明提供了一种盐酸哌替啶检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备盐酸哌替啶偶联抗原

将盐酸哌替啶与牛血清蛋白偶联，合成盐酸哌替啶-牛血清蛋白偶联抗原，作为盐酸哌替啶偶联抗原。

(2)制备盐酸哌替啶单克隆抗体

采用盐酸哌替啶-牛血清蛋白偶联抗原为免疫原免疫BALB/C小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗盐酸哌替啶单克隆抗体的杂交瘤细胞株；以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得盐酸哌替啶单克隆抗体。

(3)制备胶体金

取0.01％的氯金酸水溶液，加热煮沸。根据需要迅速加入1％枸橼酸三钠水溶液1ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。这样制成的胶体金颗粒的大小为20-40nm。

(4)制备胶体金垫