[发明专利]一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体地说，涉及一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基及其优化方法。

背景技术

恩拉霉素(Enramycin)，又名恩来霉素、恩霉素、持久霉素，是由土壤中分离出来的杀真菌素链霉菌(Streptomyces fungicidious CGMCC NO.4113)发酵产生的一种多肽类抗生素，主要由恩拉霉素A和恩拉霉素B组成。该药于1966年由日本武田药品工业株式会社研发，1974年在日本正式注册，其后在许多国家被注册和广泛使用。1993年，我国农业部批准该药在我国注册。恩拉霉素能改变肠道内的细菌群落分布，有利于饲料营养成分的消化吸收，促进动物增重和提高饲料利用率。

恩拉霉素是目前饲料添加剂中广泛使用的抗生素之一，具有广谱、无残留、不产生耐药性等优点。作为肽类抗生素，即使在胃液的低pH条件下恩拉霉素也表现出很高的稳定性，能抑制革兰氏阳性菌的活性，而且具有抑制梭状芽孢杆菌和杆菌类菌属形成芽孢的能力。

由于恩拉霉素独特的优点，使其具有良好的社会效益和环境效益，成为新型抗生素的重要来源，具有广阔的市场前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基。

本发明的另一目的是提供上述发酵培养基的优化方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基，其配方为(g/L)：葡萄糖2.0-5.0w/v％、玉米淀粉1.0-3.0w/v％、玉米蛋白粉2.0-5.0w/v％、棉籽饼粉0.5-2.5w/v％、尿素0.1-0.5w/v％、磷酸二氢钾0.01-0.2w/v％、氯化钠0.1-0.5w/v％和碳酸钙0.5-1.5w/v％，其余为水，pH6.5-7.0。

本发明还提供上述发酵培养室的优化方法，其包括以下步骤：

1)确定常规培养基的最适配方1

在常规培养基的基础上，选择葡萄糖和玉米淀粉为碳源，玉米蛋白粉为氮源，以磷酸二氢钾和氯化钠为无机盐，通过四因素三水平的正交实验，观察恩拉霉素的产量，确定常规培养基的最适配方1；

2)确定棉籽饼粉培养基最佳配方2

在配方1的基础上，以棉籽饼粉部分替代玉米蛋白粉，确定棉籽饼粉的最适添加量，分别以0.1％、0.3％、0.5％、1.0％、1.5％、2.0％和2.5％共7个水平的棉籽饼粉替代玉米蛋白粉，观察随着棉籽饼粉比重在配方中的变化对恩拉霉素产量的影响，确定棉籽饼粉培养基最佳配方2；

3)确定尿素培养基最佳配方3

在配方1的基础上，以尿素部分替代玉米蛋白粉，确定尿素的最适添加量，分别以0.1％、0.3％、0.5％、1.0％、1.5％、2.0％和2.5％共7个水平的尿素替代玉米蛋白粉，观察随着尿素比重在配方中的变化对恩拉霉素产量的影响，确定尿素培养基最佳配方3；

4)确定在配方1中同时添加棉籽饼粉和尿素的培养基最佳配方4

参照配方2和配方3的过程中棉籽饼粉和尿素各自对恩拉霉素产量的影响，设计L9(34)正交试验，4个影响因素分别为：棉籽饼粉(因素A)、尿素(因素B)、葡萄糖(因素C)、玉米淀粉(因素D)，每个因素设3个添加量水平，从正交实验结果观察恩拉霉素产量最高的发酵培养基，确定最佳配方4。。

其中，步骤1)中所述的常规培养基配方为：葡萄糖3.0-5.0w/v％，玉米淀粉1.0-3.0w/v％，玉米蛋白粉3.0-5.0w/v％，磷酸二氢钾0.01-0.05w/v％，氯化钠0.1-1w/v％，碳酸钙0.1-1w/v％，其余为水，pH6.5-7.0。

本发明还提供所述发酵培养基在恩拉霉素发酵生产中的应用，其是以链霉菌作为发酵菌株，进行恩拉霉素发酵生产。

优选链霉菌为菌株FYFJ03，保藏号CGMCC No.4113。

本发明提供的发酵培养基，大大提高了以链霉菌作为发酵菌株，生产恩拉霉素的能力，对于恩拉霉素产量的提高效果明显，适用于大规模发酵生产恩拉霉素。本发明提供的发酵培养基的优化方法简单有效，可快速、准确地确定用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基的最佳配方。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

以下实施例中培养基配方中的各组分均为市售商品。

实施例

实验菌种为杀真菌素链霉菌突变菌株FYFJ03，其保藏号CGMCC No.4113，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2010年8月25日。

(一)确定常规培养基的最适配方1