[发明专利]三唑仑检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于由样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸样垫和PVC支撑板组成，样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫紧密粘附在PVC支撑板上；所述样品垫为玻璃纤维；所述胶体金垫为胶体金标记的三唑仑单克隆抗体聚酯膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被了三唑仑-牛血清白蛋白偶联抗原作为检测线(T线)，羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线(C线)；所述吸样垫为吸水纸。

2.一种权利要求1所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的三唑仑单克隆抗体由三唑仑-牛血清蛋白偶联抗原作为免疫原免疫BALB/C小鼠获得。

3.一种权利要求1所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的胶体金是由氯金酸(HAuCl₄)在还原剂枸橼酸三钠作用下制成大小为20-40nm的胶体金颗粒。

4.一种权利要求1所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的胶体金垫的制备方法为：取颗粒大小为20-40nm的胶体金溶液，用0.1mol/L K₂CO₃将胶体金溶液的pH值调至7.0-9.0，室温放置30分钟；在上述溶液中加入三唑仑单克隆抗体，使三唑仑单克隆抗体的浓度为10-60μg/ml胶体金，混合均匀后，室温放置30分钟；加入10％的牛血清蛋白(BSA)溶液使其浓度为10-60μl/ml，混合均匀，室温放置30分钟；12000转离心30分钟，仔细吸取上清液，弃去，剩余的沉淀用初始胶体金体积的胶体金复溶液溶解；12000转离心30分钟，仔细吸取上清液，弃去，剩余的沉淀用30％-100％初始胶体金体积的胶体金复溶液溶解，得到三唑仑单克隆抗体-胶体金标记物；将三唑仑单克隆抗体-胶体金标记物按1mL铺40-70cm²聚酯膜的比例均匀铺在聚酯膜上，再置干燥间，在温度38℃，湿度小于30％的条件下干燥24±2小时，制成胶体金垫。

5.一种权利要求1及权利要求5所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的胶体金复溶液为含0.01-0.1％的Tris，1.0-3.0％的蔗糖、0.1-1.0％的BSA的0.02M pH7.0-9.0的磷酸盐缓冲溶液。

6.一种权利要求1所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的硝酸纤维素膜上的两条线的包被方法为：设定划膜仪涂覆参数1μL/cm，分别用微量进样器取浓度为0.5-5.0mg/ml的三唑仑-牛血清蛋白偶联抗原、取浓度为0.5-5.0mg/ml羊抗鼠IgG多克隆抗体，按顺序接到划膜仪的A、B管道接口。将贴有硝酸纤维素膜的PVC板置于划膜仪的往复运动平台上，开启划膜仪，在硝酸纤维素膜上涂覆三唑仑-牛血清蛋白偶联抗原(T线)、羊抗鼠IgG多克隆抗体(C线)。划线后于温度38℃的烘箱中干燥24±2小时，保存，备用。