[发明专利]脱敏治疗效果的评价监测方法及过敏原特异性IgG4抗体检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于脱敏治疗效果的评价监测方法及过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析（ELISA）检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

脱敏疗法（desensitization）又称为特异性免疫治疗（specific immunotherapy，SIT）或减敏疗法（hyposensitization）。1997年WHO根据多年来对特异性免疫治疗机制的了解和临床疗效，提出了新的术语即特异性变态反应疫苗治疗（specific allergy vaccination ,SAV）。SAV是在临床上确定过敏性疾病患者的变应原后，将该变应原制成变应原提取液并配制成各种不同浓度的制剂，经反复注射或通过其它给药途径与患者反复接触，剂量由小到大，浓度由低到高，从而提高患者对该种变应原的耐受性，当再次接触此种变应原时，不再产生过敏现象或过敏现象得以减轻。

但进行脱敏治疗后，往往对脱敏治疗效果没有进行科学的评价，无法判断脱敏治疗的效果。成功的免疫治疗通常伴随血清特异性IgG4抗体的显著上升。早在1968年，就有研究显示SIT诱导产生的IgG抗体的相关功能。过敏原阻断性IgG抗体水平的升高，尤其是IgG4亚型抗体水平的升高，在特异性免疫治疗(specific immunotherapy，SIT)过程中，发挥了重要的作用。对于免疫治疗诱发的IgG抗体亚型的分析显示IgG1和IgG4有显著升高，尤其是IgG4。IgG4抗体水品可增高10倍～100倍。

IgG4抗体被认为捕捉过敏原，阻止过敏原到达效应细胞与IgE的结合，从而阻止肥大细胞和嗜碱性粒细胞的活化，并释放颗粒内活性介质，引发I型超敏反应（FcεRⅠ途径）。并且能够通过阻断过敏原-IgE复合物与低亲和性IgE受体的结合（FcεRⅡ途径），抑制过敏性疾病中炎症通路的活化和加剧。这些研究清楚的说明了IgG4抗体在免疫治疗中起到封闭抗体的作用。

现在评价脱敏疗效的唯一公认指标是过敏原特异性IgG4抗体的含量检测。在接受特异性免疫治疗（specific immunotherapy，SIT）后，过敏原特异性IgG4抗体含量升高，且随脱敏剂量的增加，抗体含量上升，成为免疫治疗的疗效的评个指标。通过检测过敏原特异性IgG4抗体水平对脱敏治疗效果进行评价。

酶联免疫吸附分析（ELISA）方法由于只需使用普通酶标仪，具有简单安全、经济快速的特点，适合我国多级医院进行脱敏治疗效果评价。

ELISA法检测血清样本中过敏原特异性IgG4抗体（sIgG4）是利用固相载体固定的过敏原蛋白结合血清样本中的sIgG4，洗去未结合的其他蛋白后加入酶标记的抗人IgG4抗体，与过敏原特异性IgG4抗体结合，形成过敏原-sIgG4-酶标抗体复合物，通过与酶底物显色液反应，检测结合的酶量，间接地检测出血清中的sIgG4种类及浓度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于脱敏治疗效果的评价监测方法，该评价方法在脱敏治疗过程中，为医生提供客观的指标，用以调整患者的脱敏治疗剂量，为之前进行的脱敏治疗效果提供依据；在脱敏治疗疗程结束之后，为脱敏治疗效果提供了一个客观的数据指标，避免了仅凭借医生的经验对脱敏治疗效果进行评价的弊端。

本发明的还有一个目的是针对上述监测方法提出一种灵敏度高、特异性好、使用快速方便的过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒及其制备方法，通过检测血清中的sIgG4种类及浓度判断脱敏治疗疗效以及患者的耐受情况，具有灵敏度高、特异性好和使用快速方便的优点。

本发明为解决上述提出的问题所采用的解决方案是：

用于脱敏治疗效果的评价监测方法，其特征在于在脱敏治疗结束后，通过检测血清内过敏原特异性IgG4抗体的含量，来判断所进行的脱敏治疗的疗效，当血清内过敏原特异性IgG4抗体上升显著，说明脱敏治疗效果显著，当血清内过敏原特异性IgG4抗体达到峰值后，说明脱敏治疗已经成功。

在脱敏治疗过程中，过敏原特异性IgG4抗体有一个明显的增加，成功的免疫治疗通常伴随血清特异性IgG4抗体的显著上升。当血清内过敏原特异性IgG4抗体显著升高后，说明脱敏治疗疗效明显。

过敏原特异性IgG4的酶联免疫吸附分析检测试剂盒，其特征在于包括有包被有致敏蛋白的酶标板、酶标抗体、底物显色液A、底物显色液B、样品稀释液、浓缩洗涤液和反应终止液。