[发明专利]鉴别中华乌塘鳢种群的单核苷酸多态性标记和鉴别方法

权利要求书

1.鉴别中华乌塘鳢种群的单核苷酸多态性标记，其特征在于，所述鉴别中华乌塘鳢种群的单核苷酸多态性标记位于中华乌塘鳢线粒体基因组中脯氨酸tRNA基因5’端的第29个碱基，分布在珠江口以南的中华乌塘鳢，其种群线粒体基因组中脯氨酸tRNA基因5’端的第29个碱基为T，分布在珠江口以北的中华乌塘鳢，其种群线粒体基因组中脯氨酸tRNA基因5’端的第29个碱基为C，中华乌塘鳢线粒体基因组中脯氨酸tRNA基因的全序列为：

tcaaagaagg gagattctaa ctcccacctc tagctcccaa agctagaatt ctaaattaaa    60

ctattctttg                                                           70。

2.中华乌塘鳢种群的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：

1)提取中华乌塘鳢的基因组DNA；

2)以步骤1)所得的基因组DNA为模板，PCR扩增中华乌塘鳢的线粒体基因组中脯氨酸tRNA基因，获得PCR扩增产物；

3)将PCR扩增产物进行电泳分析，若检测出330bp的PCR扩增产物，则该样品来自珠江口以北的中华乌塘鳢种群，若检测不出330bp的PCR扩增产物，则该样品来自珠江口以南的中华乌塘鳢种群。

3.如权利要求2所述的中华乌塘鳢种群的鉴别方法，其特征在于在步骤2)中，所述PCR扩增的引物为tRNA-proH和tRNA-proL，所述tRNA-proH和tRNA-proL序列如下：

tRNA-proH：5’-gtgtgagaag ggagattcta actcccaacc-3’

tRNA-proL：5’-acgggatggt ggttcgtggt at-3’。

4.如权利要求2所述的中华乌塘鳢种群的鉴别方法，其特征在于在步骤2)中，所述PCR扩增的反应体系为：总体积为25μL，PCR缓冲液10mmol/L，dNTP 0.2mmol/L，Mg²⁺1.5mmol/L，tRNA-proH 0.32mmol/L，tRNA-proL 0.4mmol/L，Taq酶1U，模板50ng，用双蒸水补齐到25μL。

5.如权利要求2所述的中华乌塘鳢种群的鉴别方法，其特征在于在步骤2)中，所述PCR扩增的程序为：95℃预变性5min；前5个循环为每个循环于95℃变性30s，67℃退火30s，退火温度每个循环后降低1℃，72℃延伸30s；后20个循环为每个循环于95℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸30s；最后1次循环结束后于72℃延伸5min。

6.如权利要求2所述的中华乌塘鳢种群的鉴别方法，其特征在于在步骤3)中，所述电泳分析采用1％琼脂糖凝胶电泳分析。