[发明专利]一种利用葡萄糖酸盐废菌体制备葡萄糖氧化酶的方法

权利要求书

1.一种利用葡萄糖酸盐废菌体制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于包括以下步骤：将葡萄糖酸盐发酵液经过板框过滤后，分离制得黑曲霉菌体；菌体洗涤后，经高压均浆机中均质处理，使其破壁自溶；通过两次超滤浓缩，得到粗制酶液，冷冻离心得到含有葡萄糖氧化酶的上清液；上清液经过盐析沉淀、透析、浓缩后得到食品级葡萄糖氧化酶。

2.如权利要求1所述的制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于葡萄糖酸盐发酵液的板框过滤分离所用的滤布孔径不大于0.45μm。

3.如权利要求1所述的制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于黑曲霉菌体的洗涤，采用pH值为5~6Tris-HCl缓冲液，菌体与缓冲液体积比为1:（5~10）。

4.如权利要求1所述的制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于黑曲霉菌体破壁自溶，采用转速达10000~15000rad/min的高压均浆机均质处理2~4hr。

5.如权利要求1所述的制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于所述黑曲霉菌体的两次超滤浓缩分别采用20000~150000Dal和150000~300000Dal分子量的超滤膜。

6.如权利要求1所述的制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于所述葡萄糖氧化酶酶液的冷冻离心采用转速12000~15000 rad/min的高压均浆机采用12000~15000rad/min的高压均浆机，在温度4℃，冷冻离心20-30min，得到含有葡萄糖氧化酶的上清液。

7.如权利要求1所述的制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于所述葡萄糖氧化酶上清液的盐析沉淀采用50~80%硫酸铵饱和度溶液，pH值为5~8，进行盐析沉淀。

8.如权利要求1所述的制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于所述葡萄糖氧化酶上清液的透析采用0.5~2%的碳酸氢钠和1~3mmol/L的EDTA进行透析。

9.如权利要求1所述的制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于所述葡萄糖氧化酶上清液的浓缩，采用分子量为2000～6000的聚乙二醇进行浓缩，温度为0~4℃。