[发明专利]PES1的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域，具体地涉及针对PES1的单克隆抗体或者来源于该抗体的能够特异性结合PES1的生物活性片段及其制备方法，以及分泌该抗体的杂交瘤细胞系，本发明还涉及包含所述抗体或其生物活性片段的试剂盒、抗肿瘤药物和检测试剂，所述抗体或其生物活性片段在检测样品中PES1蛋白水平的应用，以及所述抗体在辅助诊断肿瘤、监测肿瘤和/或肿瘤患者预后判断中的应用。

背景技术

恶性肿瘤的发病率近年来在全球范围内继续呈上升之势。由于恶性肿瘤的发病大多较为隐匿，早期没有明显症状，病人就诊时往往已经到了晚期，并且许多在临床传统病理及TNM分期表现相近的病人，其预后也有较大的差异，反映出恶性肿瘤发生、发展的复杂性。目前尚缺乏能用于诊断或预后判断的理想肿瘤标志物。如几十年来作为消化道肿瘤的标志物癌胚抗原CEA，在一些非肿瘤性疾病如胃炎、肝硬化、溃疡性结肠炎中也可有升高，其特异性并不理想。因此，寻找与恶性肿瘤发生、发展相关的肿瘤标志物和/或肿瘤抗原，对恶性肿瘤的临床诊断、监视病情发展及判断预后均有重要意义，同时对肿瘤发生的分子机制也有重要意义。

Pescadillo基因是在研究逆转录病毒诱发的斑马鱼胚胎发育缺陷中发现的，该基因在酵母、小鼠和人类均有表达，且高度保守，分别被命名为YPHI/Nop7p、Pes1和PES1，其中小鼠和人的pescadillo分子同源性高达89％。PES1基因(GenBank Accession No.NM_014303)定位于人染色体22q12.1，含有11个外显子和10个内含子，编码588个氨基酸，表达分子量约为70kD的蛋白。PES1蛋白具核定位信号序列，C端有一个小泛素化样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifyer，SUMO)位点，在第315～412aa区域具有一典型的乳腺癌敏感蛋白1C末端(breast cancer susceptibility protein 1C-terminal，BRCT)结构域。有研究表明，具有BRCT结构域的许多分子参与DNA修复、重组以及细胞周期的控制。

研究表明，在斑马鱼胚胎发育过程中，pescadillo基因突变会导致头部、眼睛、肝脏等器官的发育受到明显抑制；酵母细胞中pescadillo基因发生突变后其生长受到明显抑制，细胞被阻滞于G1或G2期，表明pescadillo在细胞增殖和细胞周期进程中起着极其重要的作用。细胞增殖包括细胞体积增加和细胞分裂两个相互协调的过程，前一过程主要进行核糖体的合成，其合成的效率受到RNA聚合酶I及其调节蛋白的调控；而细胞分裂的进行则需要启动细胞周期程序，许多蛋白质分子能同时参与这两个过程。研究表明PES1蛋白是在核糖核蛋白的生成中极为重要的关键蛋白质，在有丝分裂的后期它还参与早期核仁的形成，在有丝分裂结束后，它参与核糖核蛋白体的前体的形成，PES1突变或缺陷导致细胞周期阻滞。

研究表明，成体的小鼠肝脏经部分切除之后，残留的实质细胞迅速增殖以恢复正常的肝体积，在16～48小时内这些处于增殖阶段细胞中的Pescadillo表达水平迅速升高。外源性过量表达的Pescadillo能够转化人和小鼠的成纤维细胞，使其在软琼脂中发生锚着非依赖性生长。PES1在许多肿瘤细胞中发现有过量表达，如乳腺癌、胶质瘤、前列腺癌及胃癌等。

上述研究表明PES1与细胞的增殖、转化、恶变密切相关，并且在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要的功能。

现有技术中关于PES1的研究多是利用PES1的多克隆抗体进行的，未见PES1单克隆抗体的报道。多克隆抗体的特异性差，用于免疫组化时显色背景高，质量不易控制，难以在临床应用推广。

目前临床迫切需要特异性强、敏感性高的PES1单克隆抗体，以及能够分泌高效价所述单克隆抗体的杂交瘤细胞，以便有助于肿瘤的临床诊断、预后判断，并指导临床治疗。同时，单克隆抗体可作为PES1生物学功能研究的重要工具，用于Western blot、免疫沉淀、免疫细胞化学等实验。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种PES1的单克隆抗体或者来源于该抗体的能够特异性结合PES1的生物活性片段；

本发明的另一目的是提供分泌本发明的单克隆抗体的杂交瘤细胞系；

本发明的另一目的是一种检测PES1水平的试剂盒。

本发明的另一目的是提供本发明的单克隆抗体或其生物活性片段在制备用于检测样品中PES1水平的试剂或试剂盒中的应用。