[发明专利]一种酸性果胶酶endo-PGI及其基因和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种来源于青霉菌(Penicillium sp.)的酸性果胶酶endo-PGI及其基因和应用。

背景技术

果胶主要是直链α-1，4糖苷键连接的D-半乳糖醛酸残基组成的复合多糖，是植物细胞壁和中胶层的重要组成部分(van Buren JP.Academic Press，1991.p.1-22)。果胶酶(pectinases)是分解果胶质的多种酶的总称。根据分解糖苷键的反应性质或降解底物的性质可以分为：果胶水解酶(pectin hydrolases)、果胶裂解酶(pectin lyases，PL)、果胶酯酶(pectin esterases，PE)和原果胶酶(Alkorta I，et al.Process Biochem 33：21-28，1998)。果胶酶按其作用最适pH分为酸性果胶酶和碱性果胶酶。目前研究和应用较多的是酸性果胶酶，其酶作用最适pH在偏酸性范围，主要应用于食品行业的水果榨汁和果汁澄清，降低葡萄酒粘度，并可以与其它水解酶共同应用于饲料行业。

果胶酶主要来源于微生物(细菌，真菌和酵母菌)和植物。很多果胶酶已被纯化并进行了性质测定(Niture SK.Biologia 2008；63：1-19)。其中真菌来源的果胶酶大部分在酸性pH值下具有高活性(通常pH值4.0-6.0)。大多数商业化生产的果胶酶也是来源于真菌，尤其是来源于黑曲霉和青霉(Niture SK.Biologia 2008；63：1-19；Alkorta et al.Process Biochem 1998；33：21-28)。一些果胶酶素基因已被克隆，测序和并进行了表达(Mertens et al.Fungal Genet Biol 2008；45：1616-1624)。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种可以应用于食品与饲料行业的酸性果胶酶endo-PGI。

本发明的再一目的是提供编码上述果胶酶endo-PGI的基因。

本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组载体。

本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组菌株。

本发明的另一目的是提供一种制备上述果胶酶endo-PGI的基因工程方法。

本发明的另一目的提供上述果胶酶endo-PGI的应用。

本发明提供了一种果胶酶endo-PGI，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

MLLSTHSIVL GLLGSTSLAL ASPAAEPAEG NRLIPRGSAC TYSGVNGAAA

AIAGKAGCSS      60

ITLNNVAVPA GTTLDLTGLA AGTKVIFEGT TTFGHKQWVG PLISISGTNI

AVSGAAGHVI     120

DGQGARWWDG KGSNTKTNIK PKFFLAHNLK GASTITGLNI KDTPVQVFSI

DSSSGLTISG  180

VTIDNRNGDK GSLGHNTDGF DIGDSDHITI TGATVYNQDD CLAINSGTNI

IFSGGYCSGG    240

HGLSIGSVGG RSNNVVDTVH ISSTQVVNSQ NGVRVKAVAG ATGSIKGVTY

QDITLSGITS    300

QGVTIRQDYT NSGYTGNPTT QVPITGLTLN NVHGTVTSSG TDITVECGSA

ASCSGWTWTK     360

VAVSGGKADLCKNAPANTC                              379

其中，该酶全长379个氨基酸和一个终止密码子，N端21个氨基酸为其预测的信号肽序列“MLLSTHSIVLGLLGSTSLALA”。

因此，成熟的酸性果胶酶endo-PGI的理论分子量为36.2kDa，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2：

SPAAEPAEGN RLIPRGSACT YSGVNGAAAA IAGKAGCSSI TLNNVAVPAG

TTLDLTGLAA      60

GTKVIFEGTT TFGHKQWVGP LISISGTNIA VSGAAGHVID GQGARWWDGK

GSNTKTNIKP     120