[发明专利]急性胰腺炎免疫层析快速检测试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种急性胰腺炎免疫层析快速检测试纸条，所述试纸条由样品垫(2)、玻璃纤维膜标记垫(3)、硝酸纤维素包被膜(4)、吸水纸(5)顺次搭接粘贴在底衬(1)上构成，其特征在于，所述玻璃纤维膜标记垫(3)上涂覆有生物素-亲和素-彩色胶乳复合物标记的胰蛋白酶原-2高特异性单克隆抗体，硝酸纤维素包被膜(4)包括检测区(6)和控制区(7)，所述检测区(6)包被与玻璃纤维膜标记垫(3)上的单克隆抗体不同表位的另一胰蛋白酶原-2特异性单克隆抗体，所述控制区(7)包被抗鼠抗体。

2.根据权利要求1所述的急性胰腺炎免疫层析快速检测试纸条，其特征在于，所述生物素∶亲和素∶彩色乳胶为1∶1∶1～2∶2∶3，生物素-亲和素-彩色胶乳复合物标记的胰蛋白酶原-2高特异性单克隆抗体在玻璃纤维膜标记垫(3)上的喷膜用量为20μl～50μl/cm。

3.根据权利要求1所述的急性胰腺炎免疫层析快速检测试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素包被膜(4)上胰蛋白酶原-2特异性单克隆抗体的浓度为6～15μg/ml，在所述检测区的用量为20μl/35cm；所述抗鼠抗体的浓度为6～15μg/ml，在所述控制区的用量为20μl/35cm。

4.根据权利要求3所述的急性胰腺炎免疫层析快速检测试纸条，其特征在于，所述胰蛋白酶原-2特异性单克隆抗体和抗鼠抗体的浓度均为10μg/ml。

5.一种制备急性胰腺炎免疫层析快速检测试纸条的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用常规方法制备彩色胶乳；

(2)制备亲和素-彩色乳胶标记探针

将步骤(1)的彩色胶乳超声波处理30～60s，按重量比1∶2～1∶3将亲和素与彩色胶乳混匀，室温反应2～3小时，磷酸缓冲液洗涤后离心，PBS-TBN重悬沉淀并超声波处理30～60s，用磷酸缓冲液恢复体积后，室温放置备用；

(3)制备生物素化胰蛋白酶原-2单克隆抗体

按体积比1∶1～2∶1将Biotin-LC-NHS与胰蛋白酶原-2单克隆抗体混合，充分反应后，用PBS透析除去未标记的Biotin-LC-NHS；

(4)制备蛋白探针

按体积比为1∶6～1∶10，将步骤(3)得到的生物素化胰蛋白酶原-2高特异性单克隆抗体与步骤(2)得到的亲和素-彩色胶乳标记探针混合反应，形成蛋白探针；室温搅拌反应1～3小时后离心洗涤，沉淀用PBS-TBN溶解并超声波处理10～30秒，用磷酸缓冲液恢复体积，放置室温备用，按喷膜用量为20μl-50μl/cm，将蛋白探针喷洒到玻璃纤维膜标记垫上，并在30～35℃，湿度30％以下，将已标记的玻璃纤维膜标记垫干燥12个小时以上，备用；

(5)按常规方法，20μl/35cm的膜液量，将浓度为6～15μg/ml的与玻璃纤维膜标记垫上的胰蛋白酶原-2高特异性单克隆抗体处于不同表位的另一株胰蛋白酶原-2单克隆抗体和浓度为6～15μg/ml的抗鼠抗体包被到硝酸纤维素包被膜上；干燥备用；

(6)将样品垫、步骤(2)的玻璃纤维膜标记垫、步骤(3)的硝酸纤维素包被膜、吸水纸按序粘贴于底衬上，即得。