[发明专利]一种测定抗核小体抗体IgG的方法及试剂装置有效
申请号: | 201010619750.9 | 申请日: | 2010-12-31 |
公开(公告)号: | CN102147409A | 公开(公告)日: | 2011-08-10 |
发明(设计)人: | 何林;潘荞;肖灿;伍坚 | 申请(专利权)人: | 深圳市亚辉龙生物科技有限公司 |
主分类号: | G01N33/543 | 分类号: | G01N33/543 |
代理公司: | 深圳市千纳专利代理有限公司 44218 | 代理人: | 胡坚 |
地址: | 518054 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 测定 小体 抗体 igg 方法 试剂 装置 | ||
技术领域
本发明申请涉及一种测定抗核小体抗体IgG的方法及试剂装置,属于生物检测技术领域。
背景技术
系统性红斑狼疮(SLE)是一种波及全身结缔组织,使多脏器受损害之慢性炎症性自身免疫性疾病。该病是一种累及多个系统,以慢性非化脓性炎症为特征,临床表现复杂多样化的结缔组织病,病因尚不完全明确,一般认为可能属于多因素性,即与遗传因素、病毒感染、内分泌因素、药物因素、环境因素等有关。
在SLE发生中核小体是主要的自身抗原并且这种核小体的免疫原性很强,驱动辅助T细胞进行自身免疫应答,诱导产生抗核小体抗体(AnuA)。AnuA仅对天然的核小体以及核小体亚结构(H2A-H2B)DNA起作用,而并不与其中的DNA或组蛋白起反应,而且AnuA的形成又先于抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体。近年来,虽然国内对AnuA研究尚少,但其对SLE的诊断价值在国际上已成为一个热门话题,AnuA对SLE的临床诊断敏感性高.特异性强是SLE诊断标记性抗体之一。它可以出现在疾病的各个不同时期,出现的时间早并与疾病的活动性密切相关对SLE早期诊断和疗效动态观察有重要意义。AnuA的阳性率远远高于其他抗体,结果证实核小体是SLE的自身抗原是多种抗体的根源。也提示AnuA的检测对提高SLE的诊断有一定临床意义与应用价值,对SLE疾病诊断治疗预后观察具有重要的意义。
至今已经有许多不同的技术已被用于检测AnuA,包括LE细胞试验,免疫沉淀法、免疫印迹法、间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验的方法,但这些方法都存在着不足之处;
一、LE细胞试验
由于LE细胞试验存在着敏感性差、特异性不强、不能定量、操作费时、技术因素影响大等局限性,因而早在1987年kahn就已对是否还需要再检查LE细胞提出疑问。1994年,美国临床病理学家协会(ASCP)的实用参数/测定结果委员会更明确提出LE细胞检查是一项已过时的试验,它应被更具有确定性的免疫学方法所取代。
二、免疫沉淀法
主要用于抗原或者抗体的定性检测。其原理是指可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的情况下,按适当比例所形成的可见沉淀物现象。本法只是单一的定性试验,不能定量分析;且本底不易清除,对结果有很大影响。
三、免疫印迹法
免疫印迹是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。其不足之处在于:
(1)只能进行定性和半定量分析,无法得出被检物质具体的量。
(2)操作步骤繁琐,试验用时较长。
(3)检测的灵敏度还有待提高。
四、间接免疫荧光法
该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后,继用间接荧光抗体,与前面的抗原抗体复合物结合,形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下,根据复合物的发光情况来确定所检测的抗原。该方法评价:由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体增多,发出的荧光亮度强,因而其敏感性强。但是其不足也是明显的:
(1)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别。
(2)操作相对复杂,需要价格较昂贵的荧光显微镜,在很多基层医院难以推广,也不太适用于标本量较多的实验室。
(3)荧光测定中的本底较高,荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。
(4)结果判定需要有经验的专业人员,分析结果的客观性不足。
五、酶联免疫吸附法
现在用得最广泛的酶联免疫吸附法(ELISA)来检测AnuA。与其他生物检测或免疫检测比较,这种ELISA检测方法、技术、工具或产品仍有较多的不足而使其应用受限,这些不足主要包括以下几个方面:
(1)使用12×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原抑或抗体包被用品和反应容器,在使用时只能分成12批次、8批次或整板一次使用;
(2)定量测定所用的试剂可多达11种,每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装,并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中,不但试剂瓶种类多,加注试剂的操作也极为繁琐,如果不使用全自动酶免分析仪的话,则全部操作都要用手工来进行,而全自动酶免分析仪的价格十分昂贵,投入较大;
(3)每一检测或每次检测无试剂信息的条形码,只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息,而且所知悉的信息在检测过程中不受控,具有很大的随意性;
(4)检测试剂在检测过程中为开放方式,容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果;
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