[发明专利]用于检测新德里金属β内酰胺酶-1基因的靶序列与试剂盒

权利要求书

1.本发明涉及一种PCR检测新德里金属β内酰胺酶-1(NDM-1)基因的靶序列与试剂盒，其特征在于，试剂盒检测的靶序列具有SEQ ID NO：1核苷酸序列。

2.如权利要求1所述，NDM-1基因检测试剂盒的引物序列根据SEQ ID NO：1设计，其中一对引物扩增SEQ ID No：1上连续70～300个核苷酸，引物长度为15～35个核苷酸。

3.如权利要求1所述，所用检测NDM-1基因试剂盒的荧光探针序列和SEQ IDNo：1所示序列相同或互补，长度为20～50个核苷酸。

4.如权利要求2和3所述，试剂盒所用的引物序列可以为SEQ ID No：2和SEQID No：3的序列；荧光探针可以为SEQ ID No：4序列，其5’端标记FAM荧光基团，3’端标记的荧光淬灭基团为TAMARA或BHQ-1。引物探针序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20个核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85％以上。

5.如权利要求1所述，NDM-1基因检测试剂盒组分包括PCR缓冲液、荧光探针、Taq酶、阴性对照、阳性对照及DNA提取液。

6.如权利要求1所述，试剂盒组分按照以下浓度配制成的反应液进行扩增反应：Tris-HCl(pH8.3)10mM、KCl 50mM、明胶0.1mg/ml、dATP、dGTP、dCTP、dUTP各0.2～0.4mM、MgCl₂1.5～5mM、引物各0.2～0.5μM、荧光探针0.1～0.5μM、Taq DNA聚合酶1～5U、UNG酶0.1～1U。

7.如权利要求1所述的试剂盒，更具体地，其扩增反应液各成分终浓度为：Tris-HCl(pH8.3)10mM、KCl 50mM、明胶0.1mg/ml、dATP、dGTP、dCTP、dUTP各0.2mM、MgCl₂3.5mM、引物各0.35μM、荧光探针0.2μM、Taq DNA聚合酶1.25U、UNG酶0.5U。