[发明专利]抗CKM单克隆抗体与产生其的杂交瘤细胞株以及其的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗人肌酸激酶M型亚基(Creatine Kinase M Type，CKM)的单克隆抗体和产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及该单克隆抗体在CKMB试剂盒中的应用。特别是涉及一种能特异性结合并抑制CKM亚基活性的单克隆抗体和产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及该单克隆抗体在CKMB试剂盒中的应用。

背景技术

肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。

肌酸激酶活性测定对骨骼肌损伤和心肌损伤，特别是急性心肌梗塞的诊断具有非常重要的意义。肌酸激酶已知有两个亚基M型(肌型)和B型(脑型)，两两组合而成CK-BB、CK-MM和CK-MB三种同工酶。CK-BB主要存在于脑或肾等内脏器官中，CK-MM主要存在于骨骼肌及心肌等肌肉中，而CK-MB主要分布于心肌中。

作为肌酸激酶同工酶之一的CKMB，由于在心肌中特异性地存在，因此，CKMB的测定在心肌梗塞的诊断中为特别有用的标记。已知在患急性心肌梗塞后3小时就可以发现血清内的CKMB升高，36小时后升高为100％。在临床领域中，CKMB活性增高是心肌损伤的特异指标，对心肌梗塞早期诊断很有价值。对于CKMB活性的测定以往就提出了很多方法，目前广泛采用的是免疫抑制法。这类方法是通过用抗体来抑制酶的部分酶活或部分同工酶的酶活，从而测得CKMB的活性。作为一般的测定方法，通常是将抑制CKM的抗体加入到双试剂试剂盒中的试剂1中，该抗体可以完全抑制CKM亚基的活性而不影响CKB亚基的活性(CKBB亚基的活性忽略不计)，将测得的CKB亚基的活性乘以2即为CKMB的活性。因此，基于免疫抑制法的原理，CK-MB检测试剂盒中的抗体需要具有较好的特异性。

非专利文献1中公开了一种抗CKM单克隆抗体的制备方法，该方法用CKMB全酶作为免疫小鼠与阳性细胞株检测的抗原，然后根据酶活抑制情况进一步筛选(参见非专利文献1)。

专利文献1中也提出了一种抗CKM的单克隆抗体及其制造方法。该抗CKM的单克隆抗体为与肌酸激酶反应，阻碍CKMB活性的抗体。(参见专利文献1)。

非专利文献1：一种骨骼肌肌酸激酶单克隆抗体(A monoclonal antibody against the skeletal muscle enzyme，creatine kinase)”，Glenn E.Morris与Linda P.Head，欧洲生物化学学会联合会简讯(FEBS LETTERS)，第145卷，第1期，第163-168页，1982年8月。

专利文献1：日本公开昭63-49095

发明内容

发明要解决的问题

但是，由非专利文献1中公开的抗CKM单克隆抗体的制备方法而得到的抗体中，很多都不具备酶活抑制特性，造成筛选的工作量大，效率低。

而专利文献1中的抗CKM的单克隆抗体特异性虽然得到了提高，但是对CKMB酶活的抑制率很难接近50％。

因此，目前的抗CKM的单克隆抗体特异性还不能满足要求，需要一种特异性好，且对CKMB酶活抑制率在50％左右的杂交瘤细胞株。

本发明是针对上述课题，进行大量研究而完成的，其目的在于提供一种特异性结合并抑制CKM亚基活性、且能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，以及由该杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，进一步提供一种应用该单克隆抗体为主要原料的CKMB检测试剂盒。

解决问题的手段

本发明者们从CKM和CKB亚基序列中差异较大的片段中选取3段CKM特有的片段作为筛选抗原，采用间接ELISA法进行CKM亚基特异性单克隆抗体的筛选，最终获得了1株能够产生特异性结合CKM、且酶活抑制率接近50％的杂交瘤(2C3)作为目标细胞株，从而完成了本发明。

本发明的目的在于提供一种特异性结合CKM并抑制其酶活性的抗CKM单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的另一个目的在于提供一种由该杂交瘤细胞株所产生的抗CKM单克隆抗体。

本发明的目的还在于提供一种该杂交瘤细胞株的制备方法。

另外，本发明的目的在于提供一种单克隆抗体在CKMB试剂盒中的应用。

因此，本发明提供了下面所述的(1)至(6)的内容。

(1)产生能特异性结合CKM并抑制其酶活性的抗CKM单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

(2)(1)中所述的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC4333。