[发明专利]一种富集纯化狼毒中狼毒素的方法

权利要求书

1.一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征在于，其步骤如下：

(1)将干狼毒粉碎后用甲醇加热回流提取；

(2)将经(1)处理的狼毒素提取液过滤，回收甲醇得初提物；

(3)将所收获初提物调pH值至2-2.5，分离、收集沉淀物，并用水洗涤至中性，得到狼毒素的粗提物。

(4)将所得狼毒素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；

(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集狼毒素各阶段洗脱液；

(6)将狼毒素洗脱液浓缩回收洗脱剂，得狼毒素半成品；

(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并以甲醇，丙酮以不同体积比进行洗脱，收集狼毒素各阶段洗脱液；

(8)将所收集到的狼毒素洗脱液进行精制的狼毒素。

2.根据权利要求1所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法其特质是：所述的步骤(1)中，狼毒粉后过40～80目筛再进行甲醇加热回流提取。

3.根据权利要求1所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：在所属的步骤(1)中，甲醇的醇度为75％，提取时间为3～4小时，可提取2～3次。

4.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：所述的步骤(1)中，提取的方法为浸渍法、回流提取法，渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。

5.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是；所属的步骤(1)中，加入甲醇的体积为狼毒粉体积的5～10倍。

6.根据权利要求5所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：在所述的步骤(3)中，调节PH值所用的酸为磷酸

7.根据权利要求6所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：步骤(4)中所述吸附为静态吸附或动态吸附：步骤(5)中所述的洗脱为用30～90％的乙醇水溶液进行洗脱。

8.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：在步骤(5)和(7)中，洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。

9.根据权利要求8所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：步骤(7)中所采用丙酮与甲醇得体积比为1～7∶1。

10.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征是：在步骤(8)中，采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。