[发明专利]一种脑膜炎球菌多糖结合物中游离多糖含量的测定方法无效
申请号: | 201010623626.X | 申请日: | 2010-12-30 |
公开(公告)号: | CN102175841A | 公开(公告)日: | 2011-09-07 |
发明(设计)人: | 王婷婷;魏文进;何佳琦 | 申请(专利权)人: | 北京民海生物科技有限公司;深圳康泰生物制品股份有限公司 |
主分类号: | G01N33/48 | 分类号: | G01N33/48 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 王加岭;张庆敏 |
地址: | 102600 北京市中关村*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 脑膜炎 球菌 多糖 结合 游离 含量 测定 方法 | ||
1.一种脑膜炎球菌多糖结合物中游离多糖含量的测定方法,包括取样、离心、计算多糖浓度、计算游离多糖含量,其特征在于,离心时在脑膜炎球菌多糖结合物和待测的脑膜炎球菌多糖结合物对应的衍生物中加入脱氧胆酸钠溶液。
2.根据权利要求1所述的测定方法,其特征在于,该脑膜炎球菌多糖结合物选自A群、C群、W135群或Y群。
3.根据权利要求2所述的A群脑膜炎球菌多糖结合物中游离多糖含量的测定方法,包括以下步骤:
1)取样:取待检脑膜炎球菌多糖结合物1ml作为样1,取待检脑膜炎球菌多糖结合物对应的衍生物溶液1ml作为样3;
2)离心:另取脑膜炎球菌多糖结合物1ml置于1.5ml离心管中,取待检脑膜炎球菌多糖结合物对应的衍生物溶液1ml置于另一1.5ml离心管中;向每离心管加入100μl1%的脱氧胆酸钠溶液,冰浴保持30分钟,后加入0.5M盐酸溶液25μl,充分振荡,5000~6000rpm离心15~20分钟,每离心管单独收集上清液1ml,其中结合物上清液为样2,衍生物上清液为样4;
3)计算多糖浓度:A群脑膜炎球菌多糖结合物测定磷含量,按照“A群多糖浓度=磷含量/0.08”,计算样1、样2、样3、样4的多糖浓度C1、C2、C3、C4;
4)计算游离多糖含量:其中P为回收率,H为游离多糖含量
4.根据权利要求2所述的C群脑膜炎球菌多糖结合物中游离多糖含量的测定方法,包括以下步骤:
1)取样:取待检脑膜炎球菌多糖结合物1ml作为样1,取待检脑膜炎球菌多糖结合物对应的衍生物溶液1ml作为样3;
2)离心:另取脑膜炎球菌多糖结合物1ml置于1.5ml离心管中,取待检脑膜炎球菌多糖结合物对应的衍生物溶液1ml置于另一1.5ml离心管中;向每离心管加入100μl 1%的脱氧胆酸钠溶液,冰浴保持30分钟,后加入0.5M盐酸溶液25μl,充分振荡,5000~6000rpm离心15~20分钟,每离心管单独收集上清液1ml,其中结合物上清液为样2,衍生物上清液为样4;
3)计算多糖浓度:C群脑膜炎球菌多糖结合物测定唾液酸含量,按照“C群多糖浓度=唾液酸含量/0.8”,计算样1、样2、样3、样4的多糖浓度C1、C2、C3、C4;
4)计算游离多糖含量:其中P为回收率,H为游离多糖含量
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