[发明专利]小型化Endoglin抗体与阿霉素的偶联物及其制备方法

权利要求书

1.小型化Endoglin抗体与阿霉素的偶联物，其特征在于：偶联物Fab-ADM是由MBS作为交联剂，MBS首先与一含有-NH2的分子即ADM反应并稳定结合为活性的中间产物，然后再与一含有-S-的分子即为经胃蛋白酶消化、DTT还原的抗体片段Fab反应得到终产物，即偶联物；Fab与ADM的分子比为1∶2。

2.如权利要求1的小型化Endoglin抗体与阿霉素的偶联物的制备方法：包括以下步骤：

(1)、选用MBS作为交联剂备用；

(2)、阿霉素的MBS修饰：

调整阿霉素浓度为10mg/ml，MBS浓度为2mg/ml，以MBS与阿霉素摩尔比为10∶1调整反映体系，于室温反应30min后，立即与巯基化的单抗混合；

(3)、Endoglin抗体片段Fab的巯基化

经饱和硫酸铵沉淀及丙烯葡聚糖凝胶S-200HR纯化得到的单抗分子，与胃蛋白酶反应时的分子比约为20∶1，37℃，反应3-6小时，反应体系pH值为4.5；反应结束后，加入2M的Tris，pH8.0终止反应；调整经丙烯葡聚糖凝胶S-200HR凝胶柱纯化所得的F(ab′)2浓度为10mg/ml，加入DTT还原，其终浓度为50mM，室温反应30min，脱盐后立即与步骤(2)中的MBS修饰的阿霉素偶联；

(4)、偶联物的制备

MBS修饰的阿霉素与巯基化单抗的摩尔比为约15∶1，室温反应18h；偶联物过丙烯葡聚糖凝胶S-200HR凝胶柱纯化并超滤浓缩，于吸光度280nm处测定蛋白浓度。