[发明专利]一株抗病毒解淀粉芽孢杆菌的分离及其应用

说明书

(一)技术领域：

本发明涉及一株抗病毒解淀粉芽孢杆菌的分离及其应用，属微生物农药技术领域，特别是涉及一种有效预防烟草病毒病，促进烟草生长并且能够显著增加烟叶产量的解淀粉芽孢杆菌。

(二)背景技术：

病毒病是我国烟草上种类最多、危害最严重的一类病害，每年都给烟草生产造成巨大的经济损失。目前生产上没有同时抗几种病毒的烟草品种，也没有对病毒病特效的药剂，而大量施用农药既影响了烟叶质量，又污染了环境。如何有效预防烟草病毒病的发生是国内外科技工作者研究的热点问题。

植物根际促生菌(Plant Growth-Promoting Rhizobacteria，简称PGPR)是一类生存于植物根际、能促进植物生长的一类有益细菌。目前，关于PGPR菌株诱导植物产生对真菌、细菌等抗性的研究较多，而应用PGPR防治植物病毒病的报道较少。

Mann(1969)把Bacillus uniflagellatus施入土壤中，结果减少了烟草花叶病毒在珊西烟叶片上产生枯斑的数目。Maurhofer等(1994)用Pseudomonas fluorescens菌株CHA0处理烟草能够减少烟草坏死病毒引起病斑的数目和大小。De Meyer等(1999)用铜绿假单胞7NSK2处理烟草植株能够降低烟草花叶病毒侵染产生的枯斑大小。菌株SE34、IN937a、IN937b和IN114处理番茄幼苗能明显地降低番茄发病率和组织中黄瓜花叶病毒的含量，提高产量和株高(Zehnder，2000)。

我们从毛豆根际分离到了解淀粉芽孢杆菌菌株YHN，该菌株能够促进烟草生长，有效降低烟草病毒病的发生，并能显著提高烟叶产量。

(三)发明内容：

本发明所要解决的技术问题是提供一株抗病毒解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)YHN及其应用。

本发明所提供的解淀粉芽孢杆菌YHN，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位简称：CGMCC，保藏编号为CGMCC NO.4442，分类命名为：解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮政编码：100101。保藏日期2010年12月8日。

该菌株从菏泽毛豆根际土壤中分离，通过稀释培养获得30多个细菌菌落。以白地霉作为指示菌，筛选有抑菌活性的菌株。抑菌活性最强的一个命名为解淀粉芽孢杆菌YHN。划线纯化后，经对峙培养证明解淀粉芽孢杆菌YHN对多种病原菌有良好的抑制作用，抑制率在34％-67％。解淀粉芽孢杆菌YHN与Bacillus amyloliquefaciens strain 5359(序列号：GU250449)16S rRNA基因一致率为99％，在根据16S rRNA基因构建的系统进化树中，解淀粉芽孢杆菌YHN与Bacillus amyloliquefaciens的菌株聚类到一起，证实解淀粉芽孢杆菌YHN是解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylol iquefaciens)的一个菌株。其16S rRNA核苷酸序列如SEQ.NO.1所示。

该菌株特点如下：

该菌株菌落圆形，灰白色，无光泽，初期边缘整齐，不透明，较粘，菌落初期扁平后期凹陷皱缩。革兰染色为阳性杆菌，周生多鞭毛。该菌好氧，分解D-葡萄糖、D-木糖、甘露醇和果糖。苯丙氨酸脱氢酶反应为阴性。水解酪素，水解明胶，水解淀粉，还原硝酸盐，不能产生H₂S，甲基红试验阴性，V.P.试验阳性，吲哚试验阴性；4℃不能生长，最适生长温度28-30℃；适宜pH为7，pH为5.7不能够生长。YHN的菌落特征和生理生化特性与解淀粉芽孢杆菌一致。

该菌株应用在烟草中，对多种真菌具有抑制作用，尤其是能够有效降低烟草病毒病的发生，并能显著提高烟叶产量。

(四)附图说明

图1YHN对8种病原真菌的拮抗作用

图中：

A烟草赤星病菌Alternariaalternata B烟草枯萎病菌Fusarium oxysporum

C玉米大斑病菌Exserohilum turcicum D烟草黄萎病菌Verticillium albo-a trum

E苹果霉心病菌Trichothecium roseum F烟草炭疽病菌Colletotrichum nicotianae

G苹果腐烂病菌Cytospora mali H烟草立枯病菌Rhizoctonia solani