[发明专利]双半胚移植提高牛移植妊娠率的方法

权利要求书

1.双半胚移植提高牛移植妊娠率的方法，其特征在于：将胚胎分割成两半，将一对半胚移植到一头受体母牛中。

2.根据权利要求1所述方法，所述胚胎为紧缩桑葚胚、早期囊胚、囊胚或扩张囊胚的牛1-2级胚胎。

3.根据权利要求1所述方法，所述分割采用的方法为玻璃针分割法、直接分割法、微吸管吹吸法。

4.根据权利要求1所述方法，所述分割采用步骤为：用双面刀片线切割成显微手术刀，做洗刀平皿清洗消毒，做分割液滴洗胚胎，分割并回收。

5.根据权利要求4所述方法，所述洗刀平皿清洗消毒步骤为：准备四个培养皿，分别加超纯水，75％乙醇，超纯水，PBS溶液Splitting，每分割1-2个胚胎按顺序清洗刀一遍。

6.根据权利要求3所述方法，所述分割液滴洗胚胎步骤为：在培养皿的盖或底上做分割液滴，每滴50-70ul，将1-2枚胚胎从Holding液中取出，在Splitting液中洗2-3次后放入分割液滴中，准备分割。

7.根据权利要求3所述方法，所述回收为将分割后的胚胎用吸有Holding液的吸管进行回收，一对半胚放入一个培养孔中。

8.根据权利要求1-4任一所述的方法，所述胚胎为冷冻胚胎，所述方法还包括在分割前对冷冻胚胎进行解冻。

9.根据权利要求1所述方法，所述受体母牛为同期发情或自然发情后7.0-8.0天的黄体合格的母牛。

10.根据权利要求1所述方法，所述移植是将一对半胚用4段液法装入一支细管的中段，细管装入移植枪，将胚胎移植到受体有黄体一侧子宫角的上1/3——1/2处。