[发明专利]一种生物反应器的动物细胞培养性能的检验方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物反应器的性能检验方法。更具体地，本发明涉及一种生物反应器的动物细胞培养性能的检验方法。

背景技术

利用生物反应器来进行动物细胞的培养是动物细胞大规模培养技术的基础，其可以实现动物细胞工业化和规模化生产，已成为生物制药的主流方向。动物细胞大规模培养技术是指在人工条件下(设定pH、温度、溶氧等)，在生物反应器中高密度大量培养动物细胞的技术，培养所得的动物细胞可以用于生产生物制品。该技术的核心要素包括：高效表达的细胞系/病毒株、个性化的细胞培养基、精良的生物反应器设备、以及合理的细胞培养工艺等。

其中，生物反应器是动物细胞大规模培养技术的核心基础设备，现已广泛应用于生物制药行业中。生物反应器的动物细胞培养性能对动物细胞大规模培养起着直接的作用，进而影响着生物制品的产量和质量。但目前尚无生物反应器的动物细胞培养性能的检验方法，因而无法对生物反应器的动物细胞培养性能进行系统检验，更无法对不同批次、不同型号以及不同使用年限的生物反应器进行统一的系统的检验。

发明内容

本发明的目的是提供一种生物反应器的动物细胞培养性能的检验方法，使用该方法可以实现对生物反应器的动物细胞培养性能进行系统检验。

本发明提供了一种生物反应器的动物细胞培养性能的检验方法，该方法包括：

1)生物反应器灭菌；

2)向灭菌后的生物反应器中通入无菌动物细胞培养基，接种种子细胞悬液，接种密度为2×10⁵-5×10⁵细胞/毫升，其中，所述种子细胞悬液的细胞活率不低于90％；

3)在生物反应器中培养动物细胞48-144小时；

4)观察步骤3)所得培养物中动物细胞的形态，并计算步骤3)所得培养物中动物细胞的细胞密度和细胞活率。

本发明提供的检验方法使对生物反应器的动物细胞培养性能进行系统检验成为可能。因而保证了同一型号不同批次的生物反应器，甚至不同型号的生物反应器，以及型号相同但使用年限不同的生物反应器在动物细胞培养性能方面能够得到统一的标准的系统检验，从而保证了使用生物反应器大规模培养得到的动物细胞具有高度的一致性，以适应与动物细胞有关的生物制品(尤其是生物制药)的要求。

附图说明

图1实施例1的120L生物反应器培养72小时后得到的CHO细胞照片(放大倍数为420倍)；

图2实施例2的650L生物反应器培养72小时后得到的经台盼蓝染色的CHO细胞照片(放大倍数为150倍)。

具体实施方式

本发明提供了一种生物反应器的动物细胞培养性能的检验方法，该方法包括：

1)生物反应器灭菌；

2)向灭菌后的生物反应器中通入无菌动物细胞培养基，接种种子细胞悬液，接种密度为2×10⁵-5×10⁵细胞/毫升，其中，所述种子细胞悬液的细胞活率不低于90％；

3)在生物反应器中培养动物细胞48-144小时；

4)观察步骤3)所得培养物中动物细胞的形态，并计算步骤3)所得培养物中动物细胞的细胞密度和细胞活率。

以上所述细胞密度＝细胞总数/种子细胞悬液或培养物的体积；所述细胞活率＝100％×活细胞数/细胞总数。其中，活细胞数可以采用本领域常规的方法测得。例如，台盼蓝染色法包括如下步骤：

a)吸取样品(种子细胞悬液或培养物)，用平衡盐溶液稀释，与台盼蓝染液1∶1混匀，静置2～3分钟。

b)将盖玻片盖于血球计数板中心的计数室(容积为0.1μl)上方。沿盖玻片边缘点加样品，使其通过毛细作用自然渗入，不要留有气泡，不要外溢，在放大倍数为100倍的光学显微镜下计数。活细胞未着色，死细胞被染成蓝色。

c)观察血球计数板四角大方格中的细胞数，细胞压中线时，一般遵循“计左不计右，计上不计下“的原则。将血球计数板观察的细胞数代入下列公式：

血球计数板观察细胞数×10⁴×稀释倍数/4＝细胞数/毫升；

血球计数板观察活细胞数/细胞总数×100％＝细胞活率。