[发明专利]山核桃胚根不定芽诱导和生根培养基及组培方法

权利要求书

1.一种山核桃胚根不定芽诱导和生根培养基，其特征是包括不同诱导时期的四种培养基，各种培养基的原料及其附加量分别是：

(1)初代培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖20～30g/L、Agar type A即琼脂A 6.5～8.5g/L，培养基的pH值为5.7；

(2)胚根不定芽诱导培养基：MS附加蔗糖20～30g/L、琼脂A 6.5～8.5g/L、Picloram即4-氨基-3，5，6-三氯吡啶羧酸0.01mg/L、6-BA即6-氨基腺嘌呤1.0～3.0mg/L，pH值5.7；

(3)不定芽增殖培养基：MS附加蔗糖20～30g/L、琼脂A6.5～8.5g/L、Picloram0.01～0.02mg/L、6-BA1～2mg/L，pH值为5.7；

(4)不定芽生根培养基：MS附加蔗糖20～30g/L，琼脂A6.5～8.5g/L、IAA即吲哚乙酸0.3～0.8mg/L，pH值5.7。

2.一种用权利要求1所述的培养基进行山核桃胚根不定芽诱导及生根的组培方法，其特征是经过下列步骤：

(1)外植体采集与消毒：选取健壮的山核桃开花后100～120天所结的幼果，依次进行自来水冲洗2h，超净工作台上用75％乙醇灭菌3min，无菌水冲洗3～4次，浓度为0.525％的NaClO灭菌20min并抽真空，无菌水冲洗5次后，用灭菌滤纸吸干表面水分，并剥去革质果皮，取出幼胚待用； 

(2)初代培养：将步骤(1)无菌条件下取出的幼胚接入前述的初代培养基中，每天转接1次；3天后改为每3天转接一次，每次均转接至相同的新鲜培养基中，共转接三次，其中前7天置于暗柜中培养，后5天置于光暗周期为光16h/暗8h的条件下培养，培养温度为25±2℃；

(3)胚根不定芽诱导：将初代培养后胚根发育良好的幼胚接入前述的胚根不定芽诱导培养基中，经过30d的诱导，获得不定芽，微电脑时控开关控制培养室每日光照时间，每日光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40～50μmol m^-2s^-1，培养温度为25±2℃；

(4)不定芽增殖培养：将获得的不定芽在前述的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，30天继代1次，共继代3次，增殖系数为5～8，光照培养，光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40～50μmol m^-2s^-1，培养温度为25±2℃；

(5)生根诱导：前述的不定芽在生根培养基中诱导生根，培养30天，生根率达50％，光照培养，光暗周期为光16h/暗8h，光照强度为40～50μmol m^-2s^-1，培养温度为25±1℃。