[实用新型]人载脂蛋白B100(Apo-B100)ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于检测人载脂蛋白B100的试剂盒。

背景技术

酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而有效的保证试验结果的特异性与稳定性。

肝脏合成的载脂蛋白B100(Apo-B100)是人血浆中低密度脂蛋白(LDL)及极低密度脂蛋白(VLDL)的主要载脂蛋白。大量临床研究指出，高水平的Apo-B100是提示动脉粥样硬化、冠心病及脑血管疾病发生的危险因素。特别是在冠心病易患性的预测上，Apo-B100的测定比总胆固醇和LDL-C的测定更好。

传统的检测Apo-B100的方法有比浊测定法、火箭免疫电泳测定法、放射性免疫扩散法(RID)等。其中比浊测定法是目前应用于载脂蛋白定量测定的比较普遍的方法，主要有两类：散射比浊法和透射比浊法。这两种方法都可以测ug/ml以上的含量，操作简便、快速，但需要特殊的激光浊度计或全自动生化分析仪，一次性投资大，价格昂贵，不适合一般实验室使用；火箭电泳法操作比较复杂，并且由于其是通过测量火箭峰的高度或面积来进行定量，所以误差较大，并且稳定性也较差，临床使用较少；由于放射免疫分析是竞争性的反应，使用RID法时被测物和标准物不能全部参与反应，测得的值是相对量而非绝对量，而且RID法存在放射性同位素半衰期短，放射性污染不易保存，稳定性差等缺点，使用中有诸多不便。

ELISA法是免疫学检测中的一项新技术，现已广泛应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断，也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定。ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点，不仅适用于临床标本的检验，而且由于一天之内可以检查几百份甚至上千份样品，因此特别适用于血清流行病学的研究。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题是：本试剂盒采用ELISA方法检测血清中的Apo-B100含量，而且在传统的ELISA技术基础上采用了生物素-亲和素放大系统，显著提高了Apo-B100检测的灵敏度。

为了解决上述技术问题，本实用新型所采用的技术方案是：一种人载脂蛋白B100(Apo-B100)ELISA试剂盒，包括酶标板，所述酶标板包括固相载体和包被层，所述固相载体为设置有多个微孔的微孔板，所述包被层附着在所述固相载体的微孔表面，所述包被层是由人载脂蛋白B100单克隆抗体涂布在微孔上形成的。

优选的，所述固相载体为96孔聚苯乙烯试剂板(PS)。

优选的，所述固相载体为48孔聚苯乙烯试剂板(PS)。

优选的，所述固相载体为60孔聚苯乙烯试剂板(PS)。

本试剂盒是利用ELISA方法来检测人血清中的Apo-B100，与传统方法相比，ELISA法敏感性高、稳定性好、操作简便，且成本较低。

附图说明

图1为本实用新型一具体实施例试剂盒的酶标板沿着一列微孔的纵剖示意图。

1固相载体微孔，2包被层。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本实用新型并能予以实施，但所举实施例不作为对本实用新型的限定。

试剂盒的酶标板包括固相载体和包被层。如图1所示，固相载体上有微孔1，包被层2附着在微孔1上。包被层是由人Apo-B100单克隆抗体涂布在微孔上形成的。固相载体采用60孔聚苯乙烯试剂板(PS)，即固相载体上每列有5个微孔，一共12列。当然也可采用90或48孔聚苯乙烯试剂板(PS)或其他材料的试剂板。

该具体实施例的试剂盒制备方法是：采用聚苯乙烯试剂板作为固相载体，在试剂板微孔条上先包被一定浓度的人Apo-B100单克隆抗体，4℃过夜，经洗板后制成包被好的酶标板，以备标本检测。分别以生物素化兔抗人Apo-B100多克隆抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素作为检测试剂A及B，以3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)及硫酸分别作为底物及终止液。

经过对试剂盒一系列的质量指标检测，包括灵敏度、重复性、特异性、回收率及线性测定，表明该检测体系成熟，本实用新型试剂盒各项指标检测结果：

1.标准曲线