[实用新型]一种检测多种植物病毒的蛋白芯片

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测多种植物病毒的蛋白芯片，属于检验检疫领域。

背景技术

番茄斑萎病毒( Tomato spotted wilt vi rus ，TSWV) 是布尼亚病毒科(Bunyaviridae) 番茄斑萎病毒属( Tospovi rus ) 的典型成员，也是寄主范围最广、最具经济重要性的病毒之一。TSWV在欧洲、北美、南美、亚洲和大洋州等多个国家和地区广泛分布，温带、亚热带和热带地区均有发生，能侵染包括烟草、大豆、番茄、花生、辣椒、莴苣、菊花、凤仙花等80 科900 多种植物，且发现的寄主种类还在不断增加。该病毒传播方式主要是蓟马以持久性方式传播。病毒粒子球形，直径约70～90 nm ，表面包裹一层约5 nm 厚的双层脂质包膜。病毒基因组为3 分体单链RNA 基因组，编码4 种结构蛋白。TSWV 为我国进境植物检疫的危险性有害生物，寄主范围广、传播途径多、适生性强，进口植物种苗携带该病毒的风险性很大，伴随着我国进出境贸易的高速增长，传入我国并危害流行的可能性极大。但研究表明TSWV 在植物提取液中非常不稳定，即使提纯病毒其免疫原性也很弱，因而多抗血清的滴度较低，常规的血清学方法由于其灵敏度低和特异性差，大大限制了对该病毒的检测。

 烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus， TRV）属于烟草脆裂病毒属(Tobravirus)。TRV通过生于土壤的线虫（Trchodorus and Paratrichodours）传播。线虫往往会在排水不良的地方发现，在这种地方TRV持续存在，并通过当地的线虫传播到敏感植物种类上。许多种类的杂草是病毒主要的所在地，马铃薯以及其它一些农作物是次要场所。TRV分布广泛，可以侵染大量的植物种类，在马铃薯、烟草、观赏植物的块茎上会引起重要的经济损失。该病毒目前是我国的检疫生物之一。烟草脆裂病毒是一类应用比较广泛而且效率和持久性较好的病毒载体，能够介导基因沉默同时不会带来病毒诱导的症状。改造后的病毒能够促进非病毒序列的插入以及对植物的后续感染，也可以鉴定宿主植物生长点的基因， 因此TRV在植物基因功能鉴定中具有广泛的应用。

黄瓜绿斑驳病毒属在欧洲、印度、韩国和日本葫芦科植物上发现的一种RNA病毒，病毒粒子细管状，长度约300×18 nm. 病毒易通过汁液传播，但病毒的寄主范围较窄。黄瓜绿斑驳花叶病毒病以种传和接触性传播为主要途径。另外，嫁接、田间作业也容易造成接触侵染。可以随种子或流水远距离传播，随农事操作在田间传播，病毒在种子或土壤内都可存活1年以上，生物学介体未知。

香石竹斑驳病毒属番茄丛矮病毒科( Tombusviridae) ，香石竹斑驳病毒属(Ca rmovirus)的典型成员，病毒粒子呈正二十面体，直径28～33 nm。Ca rMV 基因组为单组分单链正义RNA， 含4 003 n t， 包括4 个ORF， 其中ORF2和ORF3与ORF1 具有共同的起始位点， 分别为一次通读区和双重通读区， ORF4 编码38 kD的外壳蛋白。CarMV 靠汁液摩擦传播， 能侵染香石竹、中国石竹、甜石竹、苋色藜、菠菜、千日红等多种植物。引起香石竹品种退化， 长势衰弱，植株畸形，花叶，花枝变小，花碎色，叶茎和花出现枯斑，因而使产量和品质下降， 降低了观赏价值和经济价值。CarMV 在我国上海、北京、昆明等香石竹产地广泛流行，发病严重，因而迫切需要建立实用的检测方法，为该病毒病的诊断和防治、脱毒种苗的生产提供技术支撑。

　  百合无症病毒( Lily symptomless virus ，LSV) 是香石竹潜隐病毒属( Carlavirus) 成员，病毒粒子为略弯曲的线状，无包膜，长610～700nm，直径12～15nm ，螺旋对称结构。病毒基因组为单分子线形正义ssRNA，长8394nt，含有6 个ORF，其中ORF5 编码32kD 外壳蛋白，基因组RNA 3′端有一个Poly(A) [1～3 ] 。LSV 的寄主范围很窄，主要侵染百合科植物，单独侵染百合寄主时表现为隐症，与其它病毒复合侵染时则可引起严重的田间症状，直接影响了百合的花和球茎质量，给花卉生产带来重大经济损失。

     目前，检测植物病毒的方法主要采用进口抗血清检测试剂盒进行酶联免疫吸附测定（ELISA）以及用电镜直接观察组织中的病毒粒子，对检测设备和操作技能的要求较高，检测成本高，无法用于田间快速检测。

发明内容

本实用新型要解决的技术问题是提供一种成本低、使用简便、能够检测多种植物病毒的蛋白芯片。