[实用新型]一种快速定量检测降钙素原免疫层析试纸条

说明书

技术领域

本实用新型属于免疫化学检测领域，具体来说，涉及一种快速定量检测降钙素原免疫层析试纸条。

背景技术

降钙素原（procalcitonin,PCT）是无激素活性的降钙素前肽物质，是由116个氨基酸组成，分子质量为13KD的糖蛋白。PCT由神经内细胞分泌（包括甲状腺、肺和胰腺组织细胞）表达，经酶切分解为降钙素（CT）、羧基端肽和氨基端肽。PCT在人体内的半衰期为25-30h，稳定性良好，在正常人血清中含量极低。

在导致全身炎性反应综合征（SIRS）的许多情况下，诸如细菌性感染、胰腺炎、烧伤、多发伤，血中CT前肽物质的所有剪接产物异常升高，其中PCT是最主要的产物，而CT则无明显变化。血PCT水平与感染及损伤的严重程度呈正相关，且已成为用于脓毒症、严重脓毒症、脓毒性休克的诊断和疗效监测的有效指标。

目前用于检测PCT的方法有：

酶免和放免法：酶免法采用双抗体夹心，用人工合成的PCT单克隆抗体检测。方法较特异，无交叉反应。放免法利用由人工合成的57个氨基酸部分制成的R2B7特异性多克隆抗体，既能检测游离型PCT，又能检测结合型PCT，此酶免法提高了灵敏度，但耗时较长，且标记的放射性元素存在污染，因此限制了放免法的临床应用。

全自动快速定量法：此方法是羊的多克隆抗体与一个单克隆抗体与PCT分子的Calcitonin 和Katacalcin片段结合。计算机控制，操作全自动化，灵敏度高，变异系数小，重复性好。测试时间为20 min，测试范围0.06-50ng/ml。

金标法：此法用一个结合有胶体金的抗降钙素的单克隆小鼠抗体和抗降钙素的多克隆绵羊抗体进行检测。此法不依赖仪器，操作方便快速，适用于床旁检测。

免疫荧光法：是一种定量的免疫学检测方法，采用两个抗原特异性抗体与PCT两个不同抗原结合位点结合，一种抗体经荧光标记固定在管壁上，两种抗体分别与血浆或血清中PCT分子结合。荧光信号强度与PCT的浓度成正比，2h内完成。

纳米免疫磁珠是含有铁元素的超顺磁纳米颗粒，外面包覆着聚乙烯类高分子物质，并可带有羧基或氨基，用于和蛋白质分子交联。免疫磁珠在细胞和大分子分离、纯化及诊断上都已得到应用。但在免疫层析诊断试剂上还鲜有应用。美国Quantum Design公司最新推出了测定层析试纸上微量磁性物质的检测仪（MICT），能定量检测到微量（pg级）的磁性物质，为纳米免疫磁珠检测试剂的研制提供了可能。

纳米免疫磁珠检测试剂基本原理如下：利用免疫磁珠标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，标记磁珠颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，聚集在检测线上，通过MICT测定检测线上捕获磁珠的含量进行检测，而不是依靠肉眼去判定，使结果判定更为精确、灵敏、客观和便于记录保存。利用纳米免疫磁珠研制降钙素原检测快速诊断试剂尚无报道。

实用新型内容

本实用新型所要解决的技术问题是提供一种快速定量检测降钙素原免疫层析试纸条，使用本实用新型时，仅需一步操作，即可在15分钟内实现定量检测降钙素原的含量，省去了血液样本要经过离心步骤才能得到血清样本的步骤，大大提高了筛查的速度。

本实用新型解决上述问题所采用的技术方案是：一种快速定量检测降钙素原免疫层析试纸条，包括底板、样品垫、示踪粒子结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述样品垫、示踪粒子结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，水平方向顺序相接并固定在底板上；并且所述示踪粒子结合垫设有超顺磁颗粒或荧光颗粒标记的降钙素原单克隆抗体吸附层；所述硝酸纤维素膜上设置有降钙素原单克隆抗体构成的检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。

本实用新型的一个优选方式是如上所述的一种快速定量检测降钙素原免疫层析试纸条，还包括盒体，底板置于盒体内，所述盒体盒面上对应于硝酸纤维素膜的位置设有观察窗，对应于样品垫的位置设有加样孔。这里的底板还包括固定于底板的样品垫、示踪粒子结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫等部件共同位于盒体内。

所述观察窗为方形孔或透明片。

所述超顺磁颗粒为氨基化超顺磁颗粒、羧基化超顺磁纳米颗粒和羟基化顺磁纳米颗粒中的一种。

所述荧光颗粒为异硫氰酸荧光素、藻红蛋白、多甲藻黄素叶绿素蛋白、碘化丙啶和别藻青蛋白中的一种。

所述吸水垫为吸水纸或滤油纸。