[实用新型]一种检测普氏立克次体抗体的蛋白悬浮芯片系统

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测普氏立克次体抗体的蛋白悬浮芯片系统。 

背景技术

普氏立克次体(R.prowazekii)是流行性斑疹伤寒的病原体，立克次体(Rickettsia)是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物，在形态结构、化学组成及代谢方式等方面均与细菌类似：具有细胞壁；以二分裂方式繁殖；含有RNA和DNA两种核酸；由于酶系不完整需在活细胞内寄生；对多种抗生素敏感等。人感染立克次体后，经两周左右的潜伏期后急性发病，主要表现为高热、皮疹，伴有神经系统、心血管系统或其他实质脏器损害的症状。这些症状与普氏立克次体在体内的繁殖及其毒素样物质的作用有关。隐性感染者或病愈病人体内可潜伏立克次体，一般认为这类人可能是普氏立克次体的储存宿主。当机体免疫力降低时，潜伏于巨噬细胞内的立克次体重又繁殖，可导致复发。 

免疫学方法酶联免疫实验(ELISA)中利用抗原与抗体特异性反应来检测抗原或抗体主要有由双抗原夹心测抗体、双抗体夹心测抗原、竞争法、间接法等。间接法测抗体的原理是特异性抗原结合到固相载体上，然后和待检血清中的相应抗体结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体与免疫复合物中的抗体结合形成酶标记抗体-抗体-固相抗原复合物，加底物显色，判断抗体含量。 

悬浮芯片(suspension array)也称液相芯片，是20世纪70年代美国Luminex公司研制出的新一代生物芯片技术，利用带编码的微球体作为载体，流式细胞仪作为检测平台，对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定。目前，该技术已广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、抗体筛选及受体与配体的识别分析等领域。 

目前发展的悬浮芯片主要是基于实验室检测方法的建立和方法评价及优化，以缩短检测时间，降低方法的检测成本。但是悬浮芯片是否能够检测人血清中的普氏立克次体抗体，其定量检测能力如何，尚缺乏模型和评价。 

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种检测普氏立克次体病原体抗体的蛋白悬浮芯片系统，该芯片系统包括：芯片基体、加液系统、悬浮芯片检测仪和计算机，其中，芯片基体内装有相关缓冲溶液和待测抗体，相关缓冲液中设置有包被捕 获抗原的033号编码微球，加液系统与芯片基体连通，以向芯片基体中加入生物素标记的二抗、荧光信号检测物，悬浮芯片检测仪包括微细管检测通道和检测激光，微细管检测通道与芯片基体连通，该微细管检测通道吸入反应后的溶液、以使得每个编码微球依次通过微细管检测通道，检测激光激发并识别编码微球的颜色及其上待测物的荧光信号，计算机与悬浮芯片检测仪相连，并记录、分析悬浮芯片检测仪的测量结果。 

进一步，所述相关缓冲溶液包括用于所述待测抗体稀释的样品稀释液、稀释所述编码微球所用的微球稀释液、稀释所述生物素标记的二抗所用的抗体稀释液、每个反应之后洗涤编码微球所用的微球清洗液、SA-PE稀释液、检测缓冲液。 

进一步，所述捕获抗原优选为普氏立克次体120C蛋白。 

进一步，所述待测抗体为血清样品。 

进一步，所述生物素标记的二抗优选为Biotin-SPA和/或Biotin-羊抗人IgG。 

进一步，所述荧光信号检测物为链亲和素-藻红蛋白。 

进一步，所述芯片基体为96孔滤板或者微量离心管。 

进一步，所述检测激光包括用激发所述编码微球基质中的颜色、识别编码微球分类编码以确定检测项目的红色激光，用于激发并识别待测分子的颜色信号、记录信号强弱以检测所述待测抗体的含量的绿色激光。 

经过大量和深入的研究，对普氏立克次体抗体的蛋白悬浮芯片制备及其检测条件作了实质性的改进和创新，其具有下列优点： 

1、抗原包被量的改进 

普氏立克次体120C蛋白的包被量是成功检测的关键，本实用新型对包被微球的抗原包被量进行实质性优化使血清样本的检测效果非常良好，并且包被悬浮芯片所需的抗原包被量很低，本实用新型的普氏立克次体120C蛋白抗原包被量为0.1～300μg/1.25×10⁶个编码微球或0.02～1200ng/2500～5000个微球/测试，而一般的ELISA试验所需抗原的包被量为1μg/测试。 

2、生物素标记的改进