[实用新型]一种检测马秋波抗体的蛋白悬浮芯片系统

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测马秋波抗体的蛋白悬浮芯片系统。 

背景技术

马秋波病毒是一种沙粒病毒，染病初期表现为发烧，然后鼻子和牙龈开始出血，胃肠内出血，30％的感染者会死亡，病毒体积小但威力大。病程第1周，逐渐出现不适、厌食和头痛，中度发热，肌痛和腰痛。头3～4日期间病人亦可诉有眼眶后头痛、关节痛、上腹部痛、恶心和呕吐及头晕，初期几乎没有咳嗽、咳痰、咽喉痛和鼻部充血，体检可见脸、颈和上胸部潮红，结膜充血和眶周水肿，口咽部粘膜充血、瘀斑，软腭部可见大小一致的小水疱，牙龈充血或自发性或轻压后出血，腋窝、上胸和上臂部位皮肤可见瘀斑，淋巴结中度肿大，肝、脾多不肿大，黄疸少见，第1周末出现少尿和脱水，神经系统症状和体征较轻，但病人可有定向障碍、手和伸舌震颤、共济失调，深部腱反射和肌张力减退，皮肤感觉过敏，病程第2周，多数病人症状迅速改善，经1～3个月恢复期，不留后遗症，20％～30％病人在起病后8～12日表现严重出血或神经系统损害、休克和/或合并细菌感染，大出血或严重神经损害或两者同时并存，均可导致死亡，急性肾功能衰竭不常见，但可以发生于休克未及时纠正和急性肾小管坏死的病人，合并感染常因白细胞增高不明显，而导致诊断延误。 

免疫学方法酶联免疫实验(ELISA)中利用抗原与抗体特异性反应来检测抗原或抗体主要有由双抗原夹心测抗体、双抗体夹心测抗原、竞争法、间接法等。间接法测抗体的原理是特异性抗原结合到固相载体上，然后和待检血清中的相应抗体结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记二抗与免疫复合物中的抗体结合形成酶标记二抗-抗体-固相抗原复合物，加底物显色，判断抗体含量。 

悬浮芯片(suspension array)也称液相芯片，是20世纪70年代美国Luminex公司研制出的新一代生物芯片技术，利用带编码的微球体作为载体，流式细胞仪作为检测平台，对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定。目前，该技术已广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、抗体筛选及受体与配体的识别分析等领域。 

目前发展的悬浮芯片主要是基于实验室检测方法的建立和方法评价及优化，以缩短检测时间，降低方法的检测成本。但是蛋白悬浮芯片方法是否能够检测人血清中的马秋波抗体，其定量检测能力如何，尚缺乏模型和评价。 

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种检测马秋波抗体的蛋白悬浮芯片系统，该芯片系统包括：芯片基体、加液系统、悬浮芯片检测仪和计算机，其中，芯片基体内装有相关缓冲溶液和待测抗体，相关缓冲液中设置有包被捕获抗原的061号编码微球，加液系统与芯片基体连通，以向芯片基体中加入生物素标记的二抗、荧光信号检测物，悬浮芯片检测仪包括微细管检测通道和检测激光，微细管检测通道与芯片基体连通，该微细管检测通道吸入反应后的溶液、以使得每个编码微球依次通过微细管检测通道，检测激光激发并识别编码微球的颜色及其上待测物的荧光信号，计算机与悬浮芯片检测仪相连，并记录、分析悬浮芯片检测仪的测量结果。 

进一步，所述相关缓冲溶液包括用于所述待测抗体稀释的样品稀释液、稀释所述编码微球所用的微球稀释液、稀释所述生物素标记的二抗所用的抗体稀释液、每个反应之后洗涤编码微球所用的微球清洗液、SA-PE稀释液、检测缓冲液。 

进一步，所述捕获抗原优选为马秋波GP2蛋白。 

进一步，所述待测抗体为血清样品。 

进一步，所述生物素标记的二抗优选为Biotin-羊抗兔和/或Biotin-羊抗人IgG。 

进一步，所述荧光信号检测物为链亲和素-藻红蛋白。 

进一步，所述芯片基体为96孔滤板或者微量离心管。 

进一步，所述检测激光包括用激发所述编码微球基质中的颜色、识别编码微球分类编码以确定检测项目的红色激光，用于激发并识别待测分子的颜色信号、记录信号强弱以检测所述待测抗体的含量的绿色激光。 

经过大量试验和深入的研究，对马秋波抗体的蛋白悬浮芯片制备及其检测条件作了实质性的改进和创新，其具有下列优点： 

1、抗原包被量的改进 

马秋波GP2蛋白抗原的包被量是成功检测的关键，本实用新型对包被微球的抗原包被量进行实质性优化使血清样本的检测效果非常良好，并且包被悬浮芯片所需的抗原包被量很低，本实用新型的抗原包被量为0.01～125μg/1.25×10⁶个编码微球，即0.002～500ng/2500～5000个微球/测试，而传统免疫学ELISA方法的包被量为4μg/测试。 

2、生物素标记的改进