[实用新型]一种检测乳品中黄曲霉毒素M1的试剂板

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测乳品中的黄曲霉毒素M1的试剂板，特别是一种检测乳品中黄曲霉毒素M1的免疫胶体金快速检测试剂板。 

背景技术

黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)属真菌毒素(Mycotoxin)，它主要是由黄曲霉和寄生曲霉所产生的，其他曲霉如片霉、青霉、镰孢霉、根霉等也可产生AFT，AFT常见于花生及其制品、玉米、棉籽，以及一些坚果类食品和饲料中。1993年AFT被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定一类致癌物，是一种毒性极强的剧毒素物质。据调查发现，霉菌影响世界上40％的食品作物，并在代谢过程中产生毒素。联合国粮农组织估计全世界谷物供应的25％受霉菌毒素污染。据报道全世界每年至少有2％的农作物因污染黄曲霉毒素而报废。动物牲畜食用被黄曲霉毒素污染的饲料后，在其泌乳中发现有黄曲霉毒素M1残留。黄曲霉毒素危害性大，存在范围广，医学专家指出黄曲霉毒素的最短致癌时间仅为24周。为了预防黄曲霉毒素中毒事件的发生，维护人类健康，世界上已有70多个国家和地区对食品中黄曲霉毒素的含量作了严格限量要求。 

美国联邦政府有关法律规定，人类消费的牛奶中M1的含量不能超过0.5μg/kg，其他动物饲料中的含量不能超过300μg/kg。根据我国国家标准GB 2761-2005《食品中真菌毒素限量》的规定，鲜乳和乳制品中黄曲霉毒素M1不得超过0.5μg/kg。 

目前检测乳品中黄曲霉毒素的方法主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和酶联免疫吸附法(ELISA)。 

薄层色谱法是检测黄曲霉毒素的传统常用方法，是应用最早、最广的分析技术，曾是我国测定黄曲霉毒素的国家标准方法之一。该方法的优点在于所用的试剂、设备简单，费用低廉，容易掌握，适用大量样品的分离、筛选，一般的实验室均可开展。但是薄层色谱法检测黄曲霉毒素灵敏度低、重现差、操作烦琐、时间长且安全性差等缺点，已越来越不适用现代分析的要求。 

高效液相色谱法是目前国内测定黄曲霉毒素使用最多、也是比较权威的方法，目前有国家标准出台，灵敏度高、精度高、能同时分析多种黄曲霉毒素类型。但该法的样品前处理相对复杂，检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多、操作时需要专门的技术人员，难以满足现代检测快速、简捷、现场化的要求。 

酶联免疫吸附法是应用抗原抗体特异性反应和酶的高效催化作用来测定黄曲霉毒素含量的免疫分析方法，具有特异性高、灵敏度高、快速、简便等优点。但是ELISA法中酶的活性易受反应条件影响，由此易造成测定结果重复性较差。此外ELISA试剂寿命短，因此需要低温保藏，而且该法在配制标准曲线时需要接触到黄曲霉毒素标准品，操作不安全。 

实用新型内容

本实用新型针对乳制品中的黄曲霉毒素M1残留开展研究，提供一种用于现场快速筛选黄曲霉毒素阳性样本的免疫胶体金快速检测试剂板。本实用新型具有简单、快速、灵敏度高等特点，无须仪器设备配合测定，检测既可在实验室中进行，也可在进行实地测定，5～10min完成对样品中黄曲霉毒素M1的定性和半定量测定。 

本实用新型试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，背衬上依次紧密粘贴着样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。其中样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相邻各部分间有1-2mm的重叠，其目的一方面是保证层析作用从样品垫到吸水垫部位顺利进行，另一方面是为了使样品溶液与样品垫有充分反应时间，样品垫上的缓冲体系可以中和样品溶液的酸碱度，保证样品溶液中的有效成分与胶体金结合垫上的金标抗体顺利发生反应。 

胶体金结合垫上包被有抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体与胶体金的结合物；硝酸纤维素膜上从样品垫到吸水垫方向依次包被有黄曲霉毒素M1-载体蛋白偶联物和羊抗鼠IgG，分别作为检测线和控制线。偶联黄曲霉毒素M1的载体蛋白可为牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、血蓝蛋白(KLH)。 

本实用新型试剂板应用层析式抗体免疫竞争原理，通过抗原和金标抗体反应显色，特异性检测乳制品中的黄曲霉毒素M1残留。如果样品溶液含有黄曲霉毒素M1残留，黄曲霉毒素M1先和胶体金颗粒上的抗体反应，因此当胶体金颗粒随样品溶液扩散至检测线时，胶体金颗粒上抗体的活性位点因被样品溶液中的黄曲霉毒素M1占据而无法与检测线上黄曲霉毒素M1特异性抗原结合；当样品中的黄曲霉毒素M1含量超过试剂板检出限时，试剂板上的检测线显色较控制线浅甚至无显色，判定为阳性。反之，当样品中黄曲霉毒素M1含量在试剂板检出限以下或无残留时，试剂板上的检测线显色与控制线相近或偏深，判定为阴性。