[实用新型]便潜血快速诊断的层析试纸

说明书

技术领域

本实用新型涉及免疫胶体金法和化学法相结合，且两种方法通过一点上样，两种路径分别实现免疫胶体金法和化学法的检测，通过两层上样垫和中间的一层隔离带而使得两种方法互不影响的一步法快速诊断层析试纸及其制备方法。

背景技术

粪便的潜血检查，是指消化道出血量很少，肉眼不见血色，而且少量红细胞又被消化分解以致显微镜下也无从发现的出血状况。隐血便消化道少量出血可不引起大便颜色改变，只有靠大便隐血试验才能确定。凡是消化道疾病引起少量出血的，均可有隐血便，因此潜血检查对于诊断多种消化道出血性疾病都有重要价值，是普查筛选消化道疾病的有效手段，潜血实验已经成为人们不断深入研究的热点。

大便潜血的主要检测方法有化学法和免疫学方法：

化学法种类繁多，常用的有邻甲苯胺法、还原酚酞法、联苯胺法、匹拉米洞法、愈创木脂法。其实验设计原理都是基于人血红蛋白中的含铁血黄素部分有催化过氧化物分解的作用，能催化试剂中的过氧化物，分解释放新生态的氧，氧化上述色原物质而呈色，呈色的深浅反映血红蛋白的多少。但是化学法缺乏准确性和特异性。外源性食物食品中如含有血红蛋白、肌红蛋白，其血红素的作用均可以使实验呈阳性，大量生食蔬菜中含有活性的植物过氧化物也可催化过氧化物分解，出现假阳性反应。血液在肠道中停留过久，血红蛋白变性，则会出现与病情不符的阴性结果。此外，如果病人服用大量的维生素C或其他具有还原性的药物，在实验中可将过氧化物还原，从而不能氧化色原物质，也可使实验出现假阴性。

免疫学方法主要包括免疫单抗法、免疫斑点法、胶乳免疫化学凝聚法、放射免疫扩散法、反向间接血凝法、胶体金标记夹心免疫检验法等。此类试验所用抗体分为两大类，即抗人血红蛋白抗体和抗人红细胞基质抗体，目前一般都采用抗人血红蛋白抗体。近年来研发的胶体金免疫层析法，将单克隆技术与胶体金技术结合，利用抗人血红蛋白的单克隆抗体与人血红蛋白可以高度特异性结合的特点来检测粪便隐血。此法不受动物的血、肉、含过氧化物酶的新鲜蔬菜、铁剂、维生素C的影响，灵敏度高，反应快速，在临床各类疾病导致出血的诊断中起到了较好的效果。用单克隆双抗体夹心胶体金显色技术，以试纸条一步法检测便隐血，方法简单、快速，具有很好的灵敏度和特异性。胶体金免疫层析试纸条因具有体积小、携带方便、不需要仪器设备、操作简单、可现场检测、3～10min出结果及结果可由肉眼根据T线颜色深浅判断等诸多优点而被广泛应用。胶体金免疫层析法融合了免疫层析技术和胶体金显色的原理，为特异快速的检测粪便潜血建立了一种新的免疫学方法。该法是利用纤维膜的毛细作用，使待测物抗原沿表面向前运动，与待测区标记的捕获物特异结合而聚集显色。免疫层析一步法目前一般是用抗人血红蛋白抗体来特异性结合人血红蛋白抗原，此法简便、快速，只特异地针对人血红蛋白抗原表位，基本排除了饮食及药物等因素的干扰，被世界卫生组织胃肠镜检查协会推荐作为粪便潜血试验的一种较为确认的方法。免疫胶体金法隐血试验有一定的灵敏度，高于或低于此范围均可出现假阴性。单克隆抗体胶体金法在检测消化道出血有时候会漏诊，其原因主要有：

①血红蛋白经过消化酶降解而变性，已不具有原来的免疫原性；

②过量的大出血而致使反应体系中抗原过剩，出现后带现象；

③病人的血红蛋白抗原与单克隆抗体不匹配。

到目前为止，单一的大便潜血FOB诊断方法的灵敏度和特异性都有待进一步提高。临床上往往需要两种或以上的方法联合检测。目前市场上已有相关的联全检测试剂出现。然而本专利涉及的采用胶体金免疫法和化学法结合检测粪便潜血方法和其它联测方法不同，能提高消化道出血的检出率，并且为一步法，操作简便。

发明内容

本实用新型目的是提供一种简便、准确、快捷、灵敏度和特异性高、适合于临床诊断或筛查用的便潜血快速诊断试纸及其制备方法。

本实用新型免疫法运用双抗体夹心免疫层析技术实现对被检样品中人血红蛋白抗原的检测，提供一种便潜血快速诊断的层析试纸，其特征在于在塑料支撑板7上紧密连接硝酸纤维素NC膜4，硝酸纤维素NC膜4包被有相互分离的检测T线9和质控C线10，所述T线为包被在NC膜上的人血红蛋白单抗，所述C线为包被在NC膜上的羊抗鼠IgG抗体；在硝酸纤维素NC膜4的一端搭接吸样垫5，硝酸纤维素NC膜4的另一端搭接含有标记人血红蛋白单抗的胶体金垫8，胶体金垫8的另一端搭接上样垫26，上样垫26及胶体金垫8上搭接隔离带3，隔离带3连接上样垫11，上样垫11一端紧密搭接化学法便潜血检测试纸2构成试纸。