[发明专利]免疫球蛋白纯化用纤维素类凝胶

说明书

技术领域

本发明涉及一种色谱用填充剂、特别是适于可在抗体医药中利用的免疫球蛋白、血液制剂用生物医药等蛋白质制剂等的分离纯化的阳离子交换型色谱用填充剂的制造与使用。

背景技术

近年来，以抗体医药为代表的蛋白质制剂可通过大量发酵及强效发酵而提高生产性。伴随于此的是亦要求纯化步骤的效率化。特别是于纯化中所使用的色谱用填充剂的高流速化及高吸附化亦与成本削减有关，因此期待得到改善。

为了实现高流速化，开发通过对基础凝胶进行交联而提高强度的手法而制造的色谱用填充剂。另外，已知通过于该些交联凝胶中组合葡聚糖等亲水性高分子而提高吸附性，且导入了此种亲水性高分子的多孔性基材于色谱用填充剂的开发领域中受到关注。

例如，于非专利文献1(色谱法杂志A(Journal of Chromatography A)，679(1994)11-22)中报告了：于由聚苯乙烯-二氧化硅所构成的核心粒子上加成离子交换基而成的、由源自葡聚糖的水凝胶所构成的离子交换吸附剂(由拜欧赛帕(Biosepra)公司(法国)以“S HyperD(商标)”而市售)，由此而提高蛋白质的吸附性能。

而且，于专利文献1(日本专利特开2008-528966号公报)中报告了：通过使用于甲基丙烯酸酯聚合物粒子上加成聚乙烯亚胺而成的色谱用填充剂，可增强蛋白质的吸附特性。

另外，于专利文献2(日本专利特开2008-232764号公报)中记载了：于在多孔性甲基丙烯酸酯粒子上固定分子量为50万的普鲁兰多糖而成的凝胶中，使用2-溴乙砜而导入配体，由此而获得显示出良好流速特性的强阳离子离子交换型色谱用基质。其中报告了达成人免疫球蛋白的吸附容量为160mg/ml。

而且，于非专利文献2(Journal of Chromatography A，1146(2007)202-215)中报告了使用葡聚糖对由琼脂糖所构成的核心粒子实施表面改性时的效果。由此可使用葡聚糖对核心粒子的表面进行改性，从而可使目标蛋白质于载体内的扩散性提高，因此可使对象物的物质移动增大。而且，作为此种设计的色谱用填充剂的例子，市售有通用电器医疗集团生命科学部(GE HEALTHCARE LIFE SCIENCES)的“SP Sepharose(商标)XL”。

另外，于专利文献3(国际公开第2007-027139号说明书)中，作为可于抗体医药制造用中利用的阳离子交换型色谱用凝胶基质的例子，报告了于在交联琼脂糖凝胶中共价键结分子量为40kDa的葡聚糖而成的粒子中，使用乙烯基磺酸而导入离子交换基，由此而获得具有143mg/ml的免疫球蛋白(IgG)吸附性能的凝胶。

如上所述，报告了通过于基础凝胶中加成亲水性高分子而提高吸附性能。然而，特别是于抗体医药的制造领域中，锐意地实践了制造的大容量化及强效化，因此对于纯化基材亦强烈要求高流速与动态吸附特性的进一步改善。

作为色谱用填充剂的以代表性的二氧化硅为基材的填充剂的高流速性优异。然而，材质于碱性条件下不稳定，因此对于通常的碱清洗性而言变得不利。

另一方面，以多糖类为基材的色谱用填充剂的耐碱性强。而且，以多糖类为基材的色谱用填充剂具有适于蛋白质大小的分离纯化的多孔性，有望用于蛋白质或疫苗制剂的分离纯化。

于作为代表性的多糖类的纤维素与琼脂糖中，纤维素的氢键的网状牢固，因此于色谱用填充剂所要求的高流速化中有利。然而，迄今为止并无以纤维素为基材而实现对于蛋白质制剂(特别是用于抗体医药的免疫球蛋白)的分离纯化而言适宜的流速特性与吸附特性的例子。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利特开2008-528966号公报

专利文献2：日本专利特开2008-232764号公报

专利文献3：国际公开第2007-027139号说明书

非专利文献

非专利文献1：Journal of Chromatography A，679(1994)11-22

非专利文献2：Journal of Chromatography A，1146(2007)202-215

发明内容

发明要解决的技术课题

于如上所述的状况中，需要提供流速特性与吸附特性均得到改善的色谱用填充剂。特别是期望提供适于抗体医药制造中的免疫球蛋白的分离纯化的色谱用填充剂、或者代替肝素凝胶的色谱用填充剂。

解决课题的技术手段