[发明专利]新的木质素抗性纤维素酶

权利要求书

1.一种修饰纤维素酶，包括位于纤维素酶催化结构域和碳水化合物结合组件之间的修饰连接肽，所述修饰连接肽长度为约6至60个氨基酸，其中至少约50％的氨基酸是脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸，所述修饰连接肽包含一个或多个氨基酸替换、插入或缺失，所述氨基酸替换、插入或缺失导致相对于衍生出所述修饰连接肽的亲本连接肽，

(a)所述连接肽的理论等电点下降；或者

(b)所述连接肽中的苏氨酸∶丝氨酸的比例增加；或者

(c)(a)和(b)都发生；

所述修饰连接肽使得与包含亲本连接肽的亲本纤维素酶相比，所述修饰纤维素酶在木质素存在下的纤维素水解活性升高并且/或者对木质素的结合下降。

2.权利要求1的修饰纤维素酶，其中所述修饰连接肽包含约20至约50个氨基酸。

3.权利要求1的修饰纤维素酶，其中所述修饰连接肽使得与亲本纤维素酶相比，在木质素存在下的纤维素水解活性升高至少10％，并且/或者对木质素的结合下降至少1/6。

4.权利要求1的修饰纤维素酶，其中所述氨基酸述替换、插入或缺失导致所述连接肽的理论等电点下降至少0.2单位并且/或者所述连接肽中的苏氨酸∶丝氨酸比例提高至少约10％。

5.权利要求1的修饰纤维素酶，其中所述纤维素酶催化结构域是糖基水解酶第5、6、7、9、12、45或61家族的元件。

6.权利要求1的修饰纤维素酶，其中所述修饰连接肽、纤维素酶催化结构域和碳水化合物结合结构域来自真菌纤维素酶。

7.权利要求6的修饰纤维素酶，其中所述真菌纤维素酶来自木霉属(Trichoderma ssp.)、曲霉属(Aspergillus ssp.)、肉座菌属(Hypocrea ssp.)、腐质霉属(Humicola ssp.)、链孢霉属(Neurospora ssp.)、Orpinomyces ssp.、赤霉菌属(Gibberella ssp.)、Emericella ssp.、毛壳霉属(Chaetomium ssp.)、金孢子菌属(Chrysosporium ssp.)、毁丝霉属(Myceliophthora ssp.)、镰刀菌属(Fusarium ssp.)、青霉属(Penicillium ssp.)、Magnaporthe ssp.、Phanerochaete ssp.、栓菌属(Trametes ssp)、埃杜香菇(Lentinula edodes)、Gleophyllum trabeiu、Ophiostoma piliferum、Corpinus cinereus、Geomyces pannorum、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)、出芽短柄霉(Aureobasidium pullulans)、Amorphotheca resinae、Leucosporidium scotti、美丽小克银汉霉(Cunninghamella elegans)、Thermomyces lanuginosa或嗜热侧孢霉(Sporotrichum thermophile)。

8.权利要求7的修饰纤维素酶，其中所述真菌纤维素酶是里氏木霉(Trichoderma reesei)Cel7A、Cel6A、Cel7B、Cel5A、Cel45A或Cel61A。

9.权利要求1的修饰纤维素酶，还包含至少一个选自以下的其他功能结构域：糖基水解结构域、碳水化物结合结构域、粘附结构域、锚定结构域和纤连蛋白样结构域。

10.权利要求1的修饰纤维素酶，其中所述修饰连接肽的理论等电点下降是通过以下方式实现的：

a.用酸性氨基酸来替换一个或多个中性或碱性氨基酸；

b.用中性氨基酸来替换一个或多个碱性氨基酸；

c.插入一个或多个酸性氨基酸；

d.除去一个或多个碱性氨基酸；或

e.a至d的至少任两项或多项的结合，

并且其中苏氨酸∶丝氨酸的比例的提高是通过以下方式实现的：

a.用苏氨酸替换一个或多个非苏氨酸氨基酸；

b.用苏氨酸替换一个或多个丝氨酸；

c.插入一个或多个苏氨酸；

d.除去一个或多个丝氨酸；

e.用非苏氨酸氨基酸替换一个或多个丝氨酸；或

f.a至e的任两项或多项的结合。