[发明专利]细胞的遗传学分析

权利要求书

1.一种从异质细胞群中的稀有细胞分离核酸的方法，所述方法包括：

(a)将所述异质细胞群分配到多个室中，以便使在含有所述稀有细胞的室中所述稀有细胞的浓度增加至少X倍，其中X是室的数目除以所述异质细胞群中稀有细胞的数目；

(b)对每个室的基本上整个区域成像以确定哪些室含有所述稀有细胞；

(c)添加试剂到含有所述稀有细胞的室中以使细胞裂解并从所述稀有细胞释放核酸到培养基中；以及

(d)只从含有已被裂解的稀有细胞的室中收集含有释放的核酸的培养基，从而从所述稀有细胞收集核酸。

2.一种从异质细胞群中的稀有细胞分离核酸的方法，所述方法包括：

(a)将所述异质细胞群分配到多个室中，以便使在含有所述稀有细胞的室中所述稀有细胞的浓度增加至少X倍，其中X是室的数目除以所述异质细胞群中稀有细胞的数目；

(b)对每个室的基本上整个区域成像以确定哪些室含有所述稀有细胞；

(c)定位所述稀有细胞在含有所述稀有细胞的室中的位置；

(d)将能量束导向所述稀有细胞在含有所述稀有细胞的室中的位置，以引起所述稀有细胞的特异性裂解而没有其他细胞显著裂解，并从所述稀有细胞释放核酸到培养基中；以及

(e)从含有已被裂解的稀有细胞的室中收集含有释放的核酸的培养基，从而从所述稀有细胞收集核酸。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述定位是通过参考所述室的图像进行的。

4.根据权利要求2-3所述的方法，所述方法还包括使所述异质细胞群与选择性结合所述稀有细胞的剂接触的步骤，其中所述剂产生作为光特性的可检测的信号。

5.根据权利要求2-4所述的方法，所述方法还包括在步骤(a)和(e)之间任一阶段添加RNA酶抑制剂的步骤。

6.根据权利要求1-5所述的方法，其中X选自下列的组：大约10、30、100、300、1,000、3,000、10,000、30,000和100,000。

7.根据权利要求1-6所述的方法，其中所述室是多孔板的孔。

8.根据权利要求2-7所述的方法，其中所述收集导致从所述稀有细胞的核酸收集达到稀有细胞核酸与非稀有细胞核酸相比最多Y倍的富集，其中Y是所述室中未裂解的非稀有细胞的数目。

9.根据权利要求2-8中任一项所述的方法，其中Y选自下列的组：大约10、30、100、300、1,000、3,000、10,000、30,000和100,000。

10.一种从异质细胞群中的稀有细胞分离核酸的方法，所述方法包括：

(a)将所述异质细胞群置于易于成像的表面上；

(b)对所述表面的基本上整个区域成像；

(c)通过参考所述表面的图像定位所述稀有细胞在所述表面上的位置；

(d)将聚焦能量束导向所述稀有细胞的位置，以引起所述稀有细胞的特异性裂解而没有其他细胞的显著裂解，并从所述稀有细胞释放核酸到培养基中；以及

(e)收集含有从已被裂解的稀有细胞中释放的核酸的培养基，从而从所述稀有细胞收集核酸。

11.根据权利要求2-10中任一项所述的方法，所述方法还包括用纳米粒子标记来标记细胞，其中所述纳米粒子标记用于改善能量束介导的细胞裂解的效率。

12.一种分析细胞内容物的方法，所述方法包括：

提供包含感兴趣的细胞的细胞群用于分析；

定位所述细胞群中的至少一个感兴趣的细胞；

将能量束导向所述至少一个感兴趣的细胞的位置，其中所述能量束具有足以至少部分裂解所述至少一个感兴趣的细胞的能量，所述至少部分裂解足以从细胞释放内容物；以及

分析从所述感兴趣的细胞释放的内容物。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，所述方法还包括：使细胞群与对所述至少一个感兴趣的细胞特异性的标记接触。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述标记包括下列的一种或多种：多克隆或单克隆抗体、抗体片段、凝集素、配体、蛋白、肽、脂质、氨基酸、核酸、修饰的核酸如锁定核酸(LNA)、或合成的小分子。