[发明专利]用于缓解神经突生长抑制的蛋白激酶A和/或酪蛋白激酶Ⅱ

说明书

技术领域

本发明涉及神经损伤或神经疾病领域，具体地，本发明涉及缓解神经元再生(例如神经突生长，neurite outgrowth)的抑制。

背景技术

神经元延伸神经突以与其他神经元或其靶组织进行通讯。成体中枢神经系统(CNS)中的这种神经元网络在损伤后仅不良地再生。这在本领域中是个问题，导致患者神经元网络损伤后的不良结局。

成体哺乳动物中枢神经系统不能再生部分归因于与损伤的髓鞘质相关的神经突生长抑制剂。髓鞘质相关的糖蛋白(MAG)、Nogo-A(也称为网状蛋白4A，Reticulon 4A)和少突胶质细胞髓鞘质糖蛋白(OMgp)为可结合Nogo受体1(NgR1)的髓鞘质相关的神经突生长抑制剂。这些髓鞘质相关蛋白，Nogo-A、MAG以及OMgp通过结合Nogo受体将来自少突胶质细胞的信号传输至神经元中。该Nogo信号传导在中枢神经系统(CNS)的发育和维持中具有关键作用。它可抑制神经元的分化、迁移以及神经突生长，导致损伤的成体中枢神经系统恢复不良。

Nogo-A通过被称为Nogo-66的结构域结合NgR1。Nogo-66结构域由66个氨基酸组成，单独的Nogo-66结构域(无Nogo-A的其他区域)足以抑制神经突生长。MAG(但既非Nogo-A也非OMgp)不仅能通过NgR1而且能通过NgR2(NgR1同源性蛋白)抑制神经突生长(6)。

NgR1使得信号传导复合物含有LINGO-1和p75^NTR或TAJ/TROY(McGee和Strittmatter Trends Neυrosci 26，193-198(2003)；Schwab等，Trends Mol Med 12，293-297(2006))。p75^NTR和TAJ/TROY均属于TNFα受体家族，且提出其作为用于启动抑制神经突生长的细胞内信号的主要组分。不确定NgR2是否使复合物含有LINGO-1和p75^NTR或TAJ/TROY。

尽管关于Nogo信号传导的信息在扩展，但关于控制该信号传导的机制的信息有限。这在本领域是个问题。已知细胞内cAMP的水平增加克服了Nogo信号传导对于神经突生长的抑制性作用(16)。然而，cAMP克服Nogo信号传导的作用的详细机制尚未知。

BDNF(神经营养因子神经生长因子家族的成员)不仅在体外刺激数种神经细胞的神经突生长(17-19，20)，而且部分地促进脊髓损伤的恢复(21-24)。使用BDNF预处理提高了培养的神经元中细胞内cAMP的水平，甚至在存在髓鞘质相关抑制剂的情况下也允许神经元延伸神经突(25)。另外，BDNF参与海马中损伤诱导的神经突萌发(26)。这些报道表明，甚至在存在神经突生长的髓鞘质相关抑制剂的情况下，BDNF也可潜在辅助中枢神经系统中神经网络的再生。然而，该作用有限，且不足以实现神经元网络的完全再生。

人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y显示了在使用维甲酸(RA)处理5天之后的BDNF依赖性神经突生长(18)。SH-SY5Y细胞响应RA启动向神经元样细胞的分化，并开始表达神经元特异性蛋白。然而，通过RA自SH-SY5Y细胞分化的神经细胞仅显示有限的形态学变化。对于SH-SY5Y衍生的神经细胞的有效神经突生长，需要BDNF处理，否则需要使用RA进行较长时间的处理(27)。在神经元方面已经研究了酪蛋白激酶II(CK2)。酪蛋白激酶II参与神经元中两种不同表面蛋白的磷酸化。这两种蛋白都与Nogo受体无关。另外，在该领域中的研究完全依赖于对于酪蛋白激酶II抑制剂的使用。由此，本领域中已经研究了细胞内CK2的功能。已知细胞内CK2活性为神经突自身生长所需。已知存在细胞外CK2。然而，如上所述，关于细胞外CK2的信息很大程度上尚属未知。更具体地，有信息表明，淀粉状蛋白β前体蛋白和神经蛋白聚糖C(neuroglican C)可在神经元表面通过内源性细胞外CK2而被磷酸化。然而，这些磷酸化对于神经突生长的作用(如果存在的话)尚属未知。

酪蛋白激酶II已经在某些体外制剂中用于处理胶原/层粘连蛋白。这些处理从未涉及细胞。这些处理仅涉及诸如胶原或层粘连蛋白之类的基质蛋白的体外制剂。

现有技术中，细胞的酪蛋白激酶II处理尚属未知。将外源性酪蛋白激酶II应用于细胞在现有技术中尚属未知。