[发明专利]酮化合物的立体选择性的酶促还原的方法

权利要求书

1.酮化合物至对应的手性羟基化合物的立体选择性的、尤其是对映选择性的酶促还原方法，其中用对映选择性的、NADH-特异性的氧化还原酶还原酮化合物，其特征在于，为了还原该酮化合物，使用这样的多肽，其在位置204-208处表现出R-ADH-标签H-[P; A]-[I; A; Q; V; L]-[G; K]-R，且它们整体表现出下述其它结构特征：

(i) N-端Rossmann卷曲GxxxGxG，

(ii) 在位置87处的NAG-基序，

(iii) 由S 139、Y 152和K 156组成的催化三联体，

(iv) 在位置37处的带负电荷的氨基酸基团，

(v) 在二聚化结构域中的2个C-端基序：[A; S]-S-F和[V; I]-DG-[G; A]-Y-[T; C; L]-[A; T; S]-[Q; V; R; L; P]，

(vi) 在位置159 (在K 156下游4个位置)处的Val或Leu，

(vii) 在位置178处的Asn，和

(viii) 在位置188处的脯氨酸基团。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用这样的多肽来还原酮化合物，

(a) 该多肽包含氨基酸序列SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:7之一，或

(b) 其中，至少70%的氨基酸与氨基酸序列SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:7之一的氨基酸相同，或

(c) 该多肽由选自SEQ ID NO:8至SEQ ID NO:14的核酸序列编码，或

(d) 编码该多肽的核酸序列在严格条件下与在(c)中提及的核酸序列之一杂交。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，使用通式I的酮化合物，

其中R₁、R₂和R₃彼此独立地选自：

1) -H，条件是，R₁不是H，

2) -(C₁-C₂₀)-烷基，其中烷基是直链或支链的，

3) -(C₂-C₂₀)-烯基，其中烯基是直链或支链的，且任选地含有至多4个双键，

4) -(C₂-C₂₀)-炔基，其中炔基是直链或支链的，且任选地含有至多4个叁键，

5) -(C₆-C₂₄)-芳基，

6) -(C₁-C₈)-烷基-(C₆-C₁₄)-芳基，

7) -(C₅-C₁₄)-杂环，

8) -(C₃-C₇)-环烷基，

其中上面在2)-8)下提及的基团是未取代的，或被下述取代基彼此独立地取代1、2或3次：-OH、卤素、-NO₂、-NH₂、-NHP和/或-M，其中P代表-(C₁-C₇)-烷基、-(C₂-C₇)-烯基、-(C₂-C₇)-炔基、-(C₆-C₁₄)-芳基或选自苄氧基羰基、三苯基甲基和叔丁基羰基的保护基，且M代表-(C₁-C₇)-烷基、-(C₂-C₇)-烯基、-(C₂-C₇)-炔基、-(C₆-C₁₄)-芳基或-(C₁-C₈)-烷基-(C₆-C₁₄)-芳基，其中在-(C₁-C₈)-烷基-(C₆-C₁₄)-芳基中的-(C₆-C₁₄)-芳基是未取代的，或被卤素取代1、2或3次，和

9)  -CH₂-X-R，其中X代表O或S，且R选自-(C₁-C₇)-烷基、苯基和苄基，其中苯基和苄基被下述取代基取代1、2或3次：-(C₁-C₇)-烷基、-S(C₁-C₃)-烷基、-O(C₁-C₃)-烷基、-NO₂、-SCF₃、卤素、-C(O)(C₁-C₃)-烷基和/或-CN，

或者，R₁与R₂一起，R₁与R₃一起，或R₂与R₃一起，形成包含3-6个C-原子的环，所述环是未取代的，或被下述取代基彼此独立地取代1、2或3次：-OH、卤素、-NO₂、-NH₂、-NHP和/或-M，且剩余基团选自上面在1)-9)下提及的基团。