[发明专利]通过发酵产生大量乙醇酸的方法

权利要求书

1.通过在包含碳源的适当的培养基中培养修饰的微生物，并从培养基回 收乙醇酸而发酵生产乙醇酸、其衍生物或前体的方法，

其中所述修饰的微生物是革兰氏阴性细菌，其经过遗传修饰以产生乙醇 酸，所述微生物进一步包含下述修饰中的至少一种：

-基因ldhA和mgsA的削弱

-基因arcA的削弱

-基因glcA、lldP和yjcG中至少一个的削弱，

和它们的组合。

2.权利要求1的方法，其中起初经过修饰以产生乙醇酸的微生物包含下 述修饰中的至少一种：

-将乙醛酸到乙醇酸之外的产物的转化的削弱(aceB、glcB、gcl、eda的削弱)

-基本上不能代谢乙醇酸(glcDEFG、aldA的削弱)

-乙醛酸途径流量的增加(icd、aceK、pta、ackA、poxB、iclR或fadR的 削弱，和/或aceA的过表达)

-由乙醛酸到乙醇酸的转化的增加(ycdW的过表达)

-NADPH的可用性的增加(pgi、udhA、edd的削弱)。

3.权利要求2的方法，其中起初经过修饰以产生乙醇酸的所述微生物包 含基因aceK的削弱。

4.权利要求1-3的方法，其中起初经过修饰以产生乙醇酸的所述微生物 进一步包含基因ldhA和mgsA的削弱。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中起初经过修饰以产生乙醇酸的所 述微生物进一步包含基因arcA的削弱。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中起初经过修饰以产生乙醇酸的所 述微生物进一步包含基因glcA、lldP和yjcG中至少一个的削弱。

7.权利要求6的方法，其中将三个基因glcA、lldP和yjcG削弱。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述碳源是下述中的至少一种： 葡萄糖、蔗糖、单糖或寡糖、淀粉或其衍生物或甘油。

9.权利要求1-8中任一项的发酵制备乙醇酸的方法，所述方法包含下述 步骤：

a)发酵修饰的微生物，其起初经过修饰以产生乙醇酸，

b)浓缩细菌或培养基中的乙醇酸，和

c)从任选地以部分或全部量(0-100％)保留在终产物中的生物质和/或发 酵液中分离乙醇酸。

10.权利要求9的方法，其中通过聚合成至少乙醇酸二聚物的步骤而分 离乙醇酸。

11.权利要求10的方法，其中通过从乙醇酸二聚物、寡聚物和/或多聚物 解聚而回收乙醇酸。

12.权利要求1-7中任一项所定义的修饰的微生物。

13.权利要求12的微生物，其中所述微生物属于肠杆菌科 (Enterobacteriaceae)。

14.权利要求13的微生物，其中所述微生物属于埃希氏菌属 (Escherichia)。