[发明专利]用于选择高效表达重组细胞系的方法

权利要求书

1.一种通过使用表达载体来选择高产量克隆的方法，所述表达载体包括： (i)包括以不可操作方式连接到多聚腺苷酸化信号的选择性标记基因的基因 表达盒；以及(ii)编码相关重组蛋白并且以可操作方式连接到多聚腺苷酸化 信号的基因表达盒。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达载体包括用包括除去了多 聚腺苷酸化信号的选择性标记基因的基因表达盒来代替含有以不可操作方式 连接到所述多聚腺苷酸化信号的所述选择性标记基因的所述基因表达盒(i)。

3.一种用于选择高产量克隆的方法，所述方法包括用限制性酶裂解表达 载体，所述表达载体包括(i)包含以可操作方式连接到多聚腺苷酸化信号的 选择性标记基因的基因表达盒以及(ii)编码相关重组蛋白并且以可操作方式 连接到多聚腺苷酸化信号的基因表达盒，由此使所述表达载体线性化，以致 所述基因表达盒(i)的所述多聚腺苷酸化信号不能操作。

4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述选择性标 记基因是dhfr(二氢叶酸还原酶)基因、谷氨酰胺合成酶基因、新霉素磷酸 转移酶基因、潮霉素B磷酸转移酶基因、嘌呤霉素N-乙酰转移酶(pac)基 因或印度斯坦链异壁菌ble基因。

5.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述相关重组 蛋白是单克隆抗体。

6.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中宿主细胞是真 核宿主细胞。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述真核宿主细胞是人类宿主细胞， 包含CHO细胞、杂交瘤细胞或F2N细胞。

8.一种表达载体，其包括：(i)包括以不可操作方式连接到多聚腺苷酸 化信号的选择性标记基因的基因表达盒；以及(ii)编码相关重组蛋白并且以 可操作方式连接到多聚腺苷酸化信号的基因表达盒。

9.根据权利要求8所述的表达载体，其包括用包括除去了多聚腺苷酸化 信号的选择性标记基因的基因表达盒来代替包括以不可操作方式连接到所述 多聚腺苷酸化信号的所述选择性标记基因的所述基因表达盒(i)。

10.根据权利要求8所述的表达载体，其包括用供引入编码所述相关重 组蛋白的基因的多克隆位点来代替编码所述相关重组蛋白并且以可操作方式 连接到所述多聚腺苷酸化信号的所述基因表达盒(ii)。

11.根据权利要求8至10中任一权利要求所述的表达载体，其中所述 选择性标记基因是可扩增的选择性标记基因。

12.根据权利要求11所述的表达载体，其中所述可扩增的选择性标记 基因是二氢叶酸还原酶基因或谷氨酰胺合成酶基因。

13.根据权利要求8至10中任一权利要求所述的表达载体，其中所述 选择性标记基因是谷氨酰胺合成酶基因、新霉素磷酸转移酶基因、潮霉素B 磷酸转移酶基因、嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因或印度斯坦链异壁菌ble基因。

14.根据权利要求8至10中任一权利要求所述的表达载体，其中所述 相关重组蛋白是单克隆抗体。

15.一种真核宿主细胞，其用根据权利要求8至10中任一权利要求所 述的表达载体转染。

16.根据权利要求15所述的真核宿主细胞，其为人类宿主细胞，包含 CHO细胞、杂交瘤细胞或F2N细胞。